多球、共培養、3D腫瘤試驗
的實時活細胞分析

越來越多的證據表明，與2D單層細胞模型相比，涉及微組織和類器官的研究能提供更多的預測性和轉化觀察結果。多細胞腫瘤球在腫瘤學和腫瘤免疫學研究中的應用也在增加。

目前用于評估腫瘤球體生長和縮減的方法通常受到耗時、昂貴和、或費力的分析工作流程的限制。這可能包括熒光探針的生物學干擾，終點法分析可能錯過有見地的時間點信息，或間接生化讀數忽略有價值的形態學洞察力。
 

Vitanovski/Getty圖像

Overview
應用說明《多球、共培養、3D腫瘤試驗的實時活細胞分析》描述了使用Incucyte® 活細胞分析系統和Incucyte® 3D多腫瘤球分析來研究3D腫瘤多球的生長，可與成纖維細胞或免疫細胞共培養，捕捉采用單時間點方法可能錯失的數據。增強型景深明場（DF-明場）圖像采集能夠對生長在細胞外基質（Matrigel™）上的多腫瘤球進行長時間成像。
 

Incucyte® 活細胞分析系統

這一優越的圖像采集可獲得具有高對比度的明場圖像，明場目標的大小、計數和偏心度會隨時間自動繪制，提供關于腫瘤球形成和生長速率的豐富的信息。可采集、分析及繪制數千張圖像，可以同時運行多達六塊96孔板，以提高通量。

   檢測工作流程   
 

本文展示了驗證方法和數據，以闡述Incucyte® 活細胞分析系統的能力，包括動態可視化和量化基質細胞對腫瘤多球形態及對化療藥物敏感性的影響，并評估免疫細胞介導的對腫瘤多球的殺傷毒性。

- 活細胞分析表明，SK-BR-3與NHDFs共培養時可形成更緊密的多球體
- 活細胞成像顯示NHDFs對MDA-MB-231多球形態的時間效應
- 闡明一組乳腺腫瘤多球體的細胞類型特異性時間生長曲線
- 在96孔板完成實時化合物分析的能力
- 實時動態可視化和定量抗體依賴性細胞介導的對靶腫瘤多球的細胞毒性（ADCC）的能力
- 赫賽汀激活的PBMC導致HER2陽性多球體活力的濃度依賴性喪失

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數據結果搶先看
 

Incucyte® S3孔板視圖可以快速可視化和定量處理效果。MCF7細胞與NHDFs共培養，接種于預包被（Matrigel）的平底96孔板（1:1比例，各1000細胞/孔），形成多球（3天）。然后用已知的標準護理和梯度稀釋的細胞毒性化合物處理球體（5天）。Incucyte® 微孔板視圖顯示了處理對多球大小的影響。頂部圖像顯示處理后5天明場目標面積（Brightfield Object Area，μm2）識別mask（黃色）。底部圖像顯示每孔總明場目標面積（Total Brightfield Object Area，μm2）（y軸）隨時間的變化（處理后0–5天）（x軸）。
 

赫賽汀誘導的PBMC對多球增殖的影響。將穩定表達核RFP（SKOV3-NR、MCF7-NR）或胞質GFP（BT-474-CyG）的腫瘤細胞接種于平底96孔板的Matrigel上（1000細胞/孔），形成多球體（3天），然后加入新分離的PBMC（E:T，5:1）和赫賽汀。Incucyte® S3明場和熒光圖像（7天，SKOV3-NR、MCF-NR；或10天，BT-474-CyG），對比未加入PBMC（上圖）和加入PBMC（下圖）的情況下，赫賽汀對腫瘤球增殖的影響（明場mask顯示為黃色）。注意在PBMC存在時HER2陽性（SKOV3和BT474）多球體熒光強度的損失。
 

HER-2陽性多球的ADCC免疫細胞殺傷的動態量化。腫瘤細胞接種于96孔平底板的Matrigel上（1000細胞/孔），形成多球（MS）3天。一旦形成，MS與新鮮分離的PBMCs（E:T，5:1）共培養，并用連續稀釋的赫賽汀處理。時間進程顯示多球體的死亡，通過球體明場目標內熒光強度的損失進行量化。赫賽汀的濃度響應曲線顯示HER2陽性多球體（SKOV3和BT-474）之間的敏感性差異。激活的T細胞群（抗CD3和IL-2，10 ng/mL）處理，導致了所有細胞類型的最大MS細胞毒性。每隔6小時收集數據，總計10天。每個數據點代表平均值±SEM，n=4孔。