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流式細胞術(shù)FCM在染色體倍性分析上的優(yōu)勢及實驗步驟介紹

瀏覽次數(shù):10307 發(fā)布日期:2021-3-17  來源:廣州吉源生物科技有限公司

倍性育種,指通過改變?nèi)旧w的數(shù)量,產(chǎn)生不同的變異個體,進而選擇優(yōu)良變異個體培育新品種。正常的配子細胞中所包含的染色體數(shù)或半數(shù)的體細胞染色體數(shù)稱為一套單倍染色體,用符號n 表示。具有一個染色體組的細胞和由這樣的細胞組成的個體稱為單倍體(n) ,具有兩個染色體組的細胞或個體稱為二倍體(2n),具有兩個以上整套染色體組的細胞或個體則稱為多倍體,包括三倍體(3n)、四倍體(4n)等。

 

傳統(tǒng)的倍性鑒定主要采用常規(guī)壓片法統(tǒng)計染色體數(shù)目,但采用這種方法很難尋找到分裂中期染色體分散良好并可進行計數(shù)的細胞,而且整個過程耗時長,檢測效率低。采用流式細胞術(shù)(Flow Cytometry,F(xiàn)CM)進行倍性分析的方法簡化了倍性分析的過程,可以快速準確檢測同一物種范圍內(nèi)不同倍性的樣品。FCM作為一項快速、高效的檢測技術(shù),被廣泛應(yīng)用于細胞分類學、植物遺傳學及植物生理學等研究領(lǐng)域中。FCM常被用于鑒定植物倍性水平,通過檢測植株G0/G1峰的細胞核DNA含量可以判斷出植物的倍性。


 


實驗原理
首先需要裂解液將組織中細胞核釋放出來,并打開DNA鏈,然后用DAPI染液將細胞核DNA上的A-T
堿基對特異性染色,再用儀器檢測出被染色的A-T堿基對發(fā)出的熒光強度。比如二倍體的熒光強度是100(橫坐標),那么單倍體的熒光強度就是50(橫坐標)。縱坐標是細胞數(shù)量的顯示,通常來說,信號峰高說明信號比較好,雜質(zhì)少。


倍性=待測樣本的峰值/參照物的峰值*參照物倍性
e.g. 100/50 x 2n = 4n

實驗儀器設(shè)備及方法
實驗步驟如下:




樣品準備
植物樣品準備:葉片的新鮮程度直接影響實驗結(jié)果。由于次生代謝產(chǎn)物的影響,會導(dǎo)致信號峰過寬,甚至檢測不到信號峰的情況。嫩葉的選擇要選取新鮮、完全舒展開、無蟲咬、無枯萎、分裂不活躍的部位實驗結(jié)果:
魚類樣品準備:大魚可以取血液樣本檢測,或者取魚組織檢測,切取0.5cm2大小的新鮮魚肉即可。
貝類樣品準備:貝類大樣本可以直接撬開貝殼,取貝的新鮮組織作為樣本。貝類幼苗需要收集剛孵化2-3天內(nèi)的浮游狀態(tài)的幼苗。
 
吉源生物采用配置紫外激光的Sysmex-Partec CyFlow 倍性分析儀,搭配Sysmex CyStain DAPI倍性分析試劑盒,在2min內(nèi)即可完成一個樣本的檢測,為您提供高效、準確的檢測結(jié)果,形成可靠數(shù)據(jù),出具專業(yè)報告。

如有實驗服務(wù)需求,請聯(lián)系我司,我們將為您提供準確、可靠的實驗解決方案!
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