不知道你有沒有注意到：細胞消化過后，仍有些細胞分散不開，吹又不敢吹，棄又棄不凈？結果聚團細胞像滾雪球一樣越聚越大、越聚越多？此時只想說一句：

細胞聚團到底是不小心污染了？還是操作失誤？聚團細胞該怎么計數？

One   為什么細胞喜歡“抱團”

首先要明確一點，常規的“抱團”是指貼壁細胞被消化后懸浮狀態下的聚集情況。細胞在貼壁生長時，聚集在一起是正常現象。當周圍細胞寥寥無幾，而這一團已經疊層生長，這就是在懸浮狀態就已經聚團的細胞再貼壁導致的。相同條件下，培養的癌細胞對密度依賴性的生長抑制敏感性降低，所以即使在形成單層后，也不會停止生長，而是相互堆積形成多層生長的聚集體。

其次，部分細胞被污染后會出現細胞聚團，這和操作有很大關系，比如：傳代鋪板時，是否進行了活細胞計數并及時調整濃度；終止消化時間點是否準確；混勻是否過于輕柔或粗暴；胰酶是否濃度過高；離心收集時，加速度是否過大等，都會直接影響子代細胞狀態。

另外，過度消化細胞、狀態不好的老化細胞也可能會出現聚團。很多人覺得細胞多多益善，經常將貼壁細胞養到疊層、或密集程度特別高時才進行傳代，如果一直這樣，不僅會縮短傳代時間，導致操作密集；同時細胞的老化會更加嚴重。另外，細胞死亡時釋放DNA，會“抓住”其他細胞，形成黏性的細胞團，若不及時處理，整體細胞狀態會惡性循環。

Two   聚團細胞狀態都不好嗎

若細胞輪廓清晰，胞體通透，呈串狀均勻聚集，證明其狀態較好，正在分裂。但是大多數情況下，聚團細胞都是輪廓模糊，細胞透光性差，甚至出現合胞體，同時伴有細胞碎片，這證明細胞已經衰老或者產生病變，狀態不佳。
 

Three   如何避免聚團細胞的生成

傳代操作前，使用緩沖液對細胞進行適當且全面地潤洗，清除死亡的細胞團和部分堆疊雜質（在選擇適當胰酶濃度時，對于不同代數的不同細胞系需進行一定的調整，如：部分貼壁牢固的細胞應將胰酶分裝后，進行預熱處理；細胞密度過高時，應該向胰酶中加入少量緩沖液，緩慢均勻地消化細胞等。對于貼壁格外牢固的細胞，可以嘗試多次分批進行消化，最大限度保證細胞狀態）。

在消化過程中，需均勻慢速晃動培養器皿，以免局部胰酶濃度過高而影響傳代。切勿用力搖動，導致邊緣松動的大片細胞直接脫落，從而增加細胞成團幾率。

培養器皿的選擇也需注意，部分實驗室會使用玻璃培養瓶，因細胞貼壁在玻璃底更容易分離。同時玻璃材質的親水性和塑料有區別，而且玻璃細胞培養瓶都是實驗室內部處理，可能會有清潔殘留，在一定程度上抑制細胞的貼壁生長，并且更容易消化，細胞之間的連接比貼壁還要緊密，聚團幾率很大。

另外，避免傳代過程中匯合度較大，本身1:3甚至1:4都可以正常培養的細胞被1:2傳代，會導致母代細胞濃度過高，在分化過程中出現堆疊現象，所以在每次細胞傳代前要對細胞進行計數。

Four已經聚團的細胞，只能棄掉嗎

如果預實驗比較緊急，或者細胞株較為珍貴，也可以在復蘇新細胞的同時，進行聚團細胞“拯救”。

首先，將帶有聚團細胞的樣品低密度連續傳代，約三代過后，可逐漸分散為獨立個體，再通過監測細胞活力狀態，判斷是否可用來進行下游實驗。若肉眼可見，即可直接通過清洗和吸出，或是在消化后將懸起的細胞樣品靜置數十秒以沉淀團塊。對于死細胞聚團，可以在細胞液中適量加入DNase以斷裂DNA。

其次，若發現珍貴細胞株雖有聚團，但對整體生長無明顯影響，短期不會做其它處理，只是計數時較為麻煩，怎么辦？人工手動計數準確度無法保證，且血細胞計數板中一旦出現聚團細胞，樣品需要重新制備，有沒有可以對帶有聚團細胞分析的自動細胞計數儀呢？

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