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通過Sapphire平臺研究基于熒光的一種蛋白質(zhì)-RNA相互作用的小分子調(diào)節(jié)劑

瀏覽次數(shù):2227 發(fā)布日期:2019-11-29  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責任自負

Azure Biosystems
國立首爾大學化學系CRI化學蛋白組學Wan Gi Byun團隊在《Chembiochem》發(fā)表了他們最新的研究成果,基于熒光的緊密結(jié)合分析發(fā)現(xiàn)了一種蛋白質(zhì)-RNA相互作用的小分子調(diào)節(jié)劑。
那為什么要研究RNA-蛋白之間的相互作用呢?
RNA和蛋白是可以相互作用的生物分子,可以通過物理性相互作用,調(diào)節(jié)彼此的生命周期和功能。mRNA編碼序列指導蛋白質(zhì)和一些調(diào)節(jié)序列的合成,而mRNA的非翻譯區(qū)域通過調(diào)控蛋白質(zhì)的翻譯、定位和與其他蛋白質(zhì)的相互作用,影響編碼蛋白的命運。另一方面,從RNA合成到降解的過程中,蛋白質(zhì)反過來可以結(jié)合和調(diào)控RNA的表達和功能。RNA與蛋白質(zhì)的相互作用對于維持細胞穩(wěn)態(tài)是非常重要的,而干擾兩者的相互作用會造成細胞功能失調(diào)和相關(guān)疾病的發(fā)生。
那如何來檢測蛋白-RNA間的相互作用呢?
讓我們一起來看看Wan Gi Byun團隊是怎么做的:
蛋白質(zhì)結(jié)合會引起微環(huán)境的變化,而這將會顯著改變與之結(jié)合的核酸偶聯(lián)的熒光基團的熒光強度。鑒于此,Wan Gi Byun團隊構(gòu)建了一種簡單而強大的分析方法來檢測let-7 miRNA及其轉(zhuǎn)錄后調(diào)控蛋白Lin28之間的相互作用。通過熒光EMSA來確定化合物的活性以及IC50,測定熒光結(jié)合強度后,經(jīng)4%丙烯酰胺凝膠電泳后,使用Azure Sapphire對Cy3和TAMRA以及Cy5的熒光信號進行可視化檢測。
 
 
Figure 3. Hit identification and validation (a) Chemical structure of hit compounds. (b) Dose-response curve obtained by fluorescence intensitybased binding assay. Error bars represent the standard deviation from three independent measurements. (c) Hit validation by EMSA.
此外,通過Western Blot來檢測下游信號通路蛋白的含量變化。
僅需一臺Sapphire即可完成EMSA和Western Blot的檢測,Sapphire的功能絕不僅限于此……
Sapphire是市面上唯一可以進行掃描式和CCD成像化學發(fā)光的雙模式成像系統(tǒng),也是唯一使用3種檢測器檢測信號的成像系統(tǒng)(APD,PMT,CCD),具有更寬的動態(tài)范圍,靈敏度更高,分辨率可達10-1000微米。
Sapphire除了完成Paper中使用的EMSA凝膠阻滯實驗外,還能完成哪些實驗?zāi)兀?br /> 可以完成DNA/Protein凝膠成像,Western Blot化學發(fā)光,多通道熒光檢測, in-cell western檢測,2D和2D-DIGE以及磷屏成像檢測……
看到這里,您對Azure Biosystems是不是更加了解了呢?是不是也想試用一下呢?那就趕緊搜索“北京深藍云生物科技”來聯(lián)系我們吧!
發(fā)布者:艾普拜生物科技(蘇州)有限公司
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