如何讓細胞乖乖沉睡或滿血復活

瀏覽次數(shù)：3980　發(fā)布日期：2019-8-21　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責任自負

養(yǎng)細胞時期的小編，
常常希望自帶一股開掛神力，
保護好嬌弱的細胞，拯救慘不忍睹的實驗！
如同《星球大戰(zhàn)》里擁有 ”原力光環(huán)“的主角們，
可以隔空移物，手接閃電，最后拯救世界！
小編至今疑惑“原力”到底是什么?
“ I am one with the force ，
and the force is with me.”
翻譯過來比較玄，很像中國武俠小說的內(nèi)力~
“ 我與原力同在，原力與細胞同在
凍存的細胞，滿血復活吧！ ”

回到現(xiàn) 實
經(jīng)常有用戶反映“細胞凍存與復蘇遇到了問題”
“如何握住原力，讓你的細胞乖乖沉睡又滿血復活？”
逍鵬生物的老司機為此做了以下總結(jié)：

選好細胞凍存液是基礎(chǔ)

使用動物血清常常會遇到很多問題，例如：病毒感染、其他動物源的污染。使用無血清制品培養(yǎng)與凍存細胞，可以消除這方面的隱患。此外，無血清凍存液可以確保細胞在化學成分固定的條件下生長，更進一步確保細胞凍存時的條件穩(wěn)定。

慢慢做冷凍

若您養(yǎng)的是貼壁細胞，請先將細胞消化下來；若是懸浮細胞，請直接按以下步驟進行：
1. 以200-300g離心3分鐘，棄去上清，收集細胞。
2. 用BI無血清凍存液將細胞重懸（不需回溫），將細胞密度調(diào)整為3~5x10⁶ cells/ml，添加到凍存管中（一般每管1ml）。
3. 建議將含有細胞懸液的凍存管放進漸進降溫盒或是保溫杯中，置于-80°C冰箱6小時以上或是過夜（或不需要程序降溫)。
4. 將凍存管迅速移到液態(tài)氮中保存。
5. 凍存24小時后，建議檢測細胞存活率。

細胞復蘇要迅速

1. 將細胞凍存管由液態(tài)氮中取出，置于室溫回溫，不用水浴溶解。此時可準備新鮮培養(yǎng) 基、無菌15ml離心管、培養(yǎng)瓶。
2. 在生物安全柜內(nèi)，直接以少量培養(yǎng)基反復沖融，使細胞團塊化凍。
3. 先在無菌15ml離心管中加入5ml培養(yǎng)基，再將化凍的細胞懸液加入離心管中。以200~300g，3分鐘離心收集細胞。
4. 倒去上清液，重懸細胞，移到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

BI無血清細胞凍存液
不含動物成份
細胞凍存與復蘇后，平均活細胞回收比例超過90%

Serum-Free Cell Freezing Medium
無血清細胞凍存液，貨號: 05-065-1A/B
無血清培養(yǎng)的細胞應該使用無血清的凍存液保存，以保持無血清培養(yǎng)體系的完整。本凍存液不含蛋白及動物組分，主要成分為DMSO和甲基纖維素。

Cryostem ACF Freezing Media
無血清干細胞凍存液（Optimized for Stem Cell），貨號: 05-710-1B/E
CryoStem對所有種類的細胞都有非常好的凍存效果，該產(chǎn)品經(jīng)過驗證，特別適用于人胚胎干細胞和人原代細胞的凍存。用CryoStem凍存融解后，細胞表現(xiàn)出極佳的復蘇率、生長活性、貼壁性和傳代能力。
MSC Freezing Medium
無血清間充質(zhì)干細胞凍存液，貨號: 05-712-1B/E
即用型溶液，特別適用于人類間充質(zhì)干細胞凍存，用MSC凍存液凍存融解后，細胞表現(xiàn)出極佳的復蘇率、生長活性。

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