第一步是確立解決實驗問題的技術(shù)，例如激活，抑制或調(diào)控靶標、闡明MOA（作用機制）、確定受體 - 配體或蛋白質(zhì) - 蛋白質(zhì)的相互作用、鑒定和定量疾病特異性生物標志物或血漿中的生物標志物成分。

 

 

生物標志物測定旨在檢測或定量生物學(xué)中的靶標樣本(例如，復(fù)雜基質(zhì)）中的含量，這種負責(zé)基質(zhì)涵蓋范圍有：細胞培養(yǎng)中的分泌蛋白，細胞裂解液，組織提取物，唾液，尿液，血清，血漿，血液的上清液，或其他液體（例如，CSF，BALF）。分析技術(shù)可能并非總是如此。某些實驗方法在某些基質(zhì)中存在干擾而不適用。例如，在血清，血漿或血液中的血紅蛋白表現(xiàn)出廣泛的可見光譜吸光度，即在350和600nm之間。檢測方法中，依賴于這些波長的激發(fā)或發(fā)射將容易發(fā)生干擾。基于洗滌的檢測方法可以避免由于過多復(fù)雜基質(zhì)引起的干擾，因為干擾物質(zhì)在洗滌過程中被沖走。為了確定基質(zhì)的相容性，在合適的稀釋液中的加標回收和標準曲線是傳統(tǒng)的驗證方法。

 

 

 

一個實驗的靈敏度決定了其在動態(tài)范圍內(nèi)的對其靶點的檢測的“分辨率”，同時預(yù)警了不同批次批次之間的最低檢測范圍的差異性。靈敏度同時也依賴于檢測樣本。血清中的檢測難度高于細胞水平。同時“珍貴樣品”如有限的細胞或者組織會決定測試的容許體積等。方法技術(shù)也會影響檢測靈敏度，如發(fā)光和熒光的模式比吸收光的模式的靈敏度要好。

 

動態(tài)范圍定義了檢測下限和上限。例如下圖所示，不同的檢測技術(shù)對于腫瘤壞死因子TNF的檢測動態(tài)范圍達到了數(shù)量級的差異。因此，當樣品含量超過了其實驗方法的動態(tài)范圍，其濃度，動力學(xué)參數(shù)，活性，結(jié)合力將不準確。因此，需要預(yù)先滴定檢測窗口以免達到飽和。

 

 

 

 

 

特異性對于確保篩選靶向的靶點或表型非常重要。對于免疫分析，需要考慮針對靶向分析物特異性的抗體，特別是對于靶向蛋白質(zhì)的部分修飾新表位變化,結(jié)合/未結(jié)合或活性/非活性狀態(tài)。此外，還需要考慮物種和靶點的交叉反應(yīng)性。

 

 

盡管信號強度和和性噪比（S/B）通常被用來評估一個實驗的質(zhì)量，可重復(fù)性和準確性也是非常重要的。Z’是一個非常好的評判標準。例如，相對而言，高Z’而低信噪比的實驗方法好于低Z’高性噪比的實驗方法。與此同時，實驗發(fā)法應(yīng)當具有高重復(fù)性，定量實驗應(yīng)該有標準品做參照。設(shè)置好對照，好的標品，抗體，陽性化合物對于建立可靠的實驗是非常重要的。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

我們珀金埃爾默能夠提供多種實驗方法開發(fā)的解決方案。例如，我們擁有的均相的Alpha技術(shù)以及TRFRET技術(shù)，時間分辨defia技術(shù)，化學(xué)發(fā)光技術(shù)，細胞增殖和毒性試劑盒，各類GPCR以及動物模型的探針細胞株，微孔板等試劑耗材，能夠助力您新藥研發(fā)的各個環(huán)節(jié)。

 

 

 

 

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