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使用HUVEC細胞進行血管生成實驗,并用LONZA核轉儀轉染anti-VEGFR2 siRNA

瀏覽次數:7634 發布日期:2017-10-27  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
Srinivasan Kokatam1, Kanchan Tiwari1, Jenny Schroeder2, Andrea Toell2, Lubna Hussain3, Preeti Kapoor1.
1. Lonza India Pvt Ltd, Hyderabad, India; 2. Lonza Cologne GmbH, Cologne, Germany; 3. Lonza Walkersville, Inc., Walkersville, MD, U.S.A.
 
實驗材料:
英文名
中文名
品牌
貨號
single donor CloneticsHUVECs
臍靜脈內皮細胞,單一供體
LONZA Clonetics
C2517A
EGM2 Media
血管內皮細胞培養基
LONZA
CC-3162
ViaLightPlus BioAssay Kit
細胞活力檢測試劑盒
LONZA
LT07-221
Matrigel
基質膠
Corning
356237
4D Nucleofector
核轉儀
LONZA
C+X+96模塊
P5 Primary Cell Nucleofector Kit
核轉試劑盒
LONZA
V4XP-5024
V4XP-5032
Calcein AM
Life Technologies
C3100MP
VEGFR2 ELISA
VEGFR2ELISA檢測試劑盒
R&D Systems
DYC1780-5
 
培養基配方:
 
實驗流程簡介:
1. 使用pmaxGFP質粒進行進行預實驗,優化HUVEC細胞核轉條件;
2. 檢測核轉條件對HUVEC細胞的Tube formation是否有影響;
3. 轉染siRNA,確定對細胞活力影響最小的最佳濃度,確定檢測蛋白表達降低的最佳時間點;
4. 評價siRNAHUVEC細胞Tube Formation的影響。
 
實驗結果:
1. HUVEC細胞轉染GFP質粒,轉染效率約為82%,對細胞形態無明顯影響:
2. HUVEC細胞進行核轉后,對Tube formation無明顯影響:
3. Anti-VEGFR2 siRNA轉染后的細胞對VEGF無反應,證明siRNA發揮作用。
 
 
參考文獻:
1. Timar, J. et. al. (2001) Angiogenesis-dependent diseases and angiogenesis therapy. Pathol. Oncol. Res.7 (2): 85-94
2. Murga M1, Fernandez-Capetillo O, Tosato G. (2005) Neuropilin-1 regulates attachment in human endothelial cells independently of vascular endothelial growth factor receptor-2. Blood 105 (5): 1992-9
3. Yang, S, Xin, X, Zlot, C et. al. (2001) Vascular Endothelial Cell Growth Factor-Driven Endothelial Tube Formation Is Mediated by Vascular Endothelial Cell Growth Factor Receptor-2, a Kinase Insert Domain-Containing Receptor. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 21: 1934-1940
4. Zumbansen M, Altrogge L, Toell A, Leake D, Muller-Hartmann H (2009) First siRNA Library Screening in Difficult-to-Transfect HUVEC and Jurkat Cells. White paper.
5. Zeitelhofer M, Vessey JP, Xie Y, Tubing F, Thomas S, Kiebler M, Dahm R (2007) High-efficiency transfection of mammalian neurons via Nucleofection. Nat. Protocols 2: 16921704
6. Kapoor, R., Reddy, V. and Kapoor, P. (2014) Tube Formation Assay with Primary Human Umbilical Vein Endothelial Cells. Resource Notes, 2014: 9-12.
發布者:北京澤平科技有限責任公司
聯系電話:13521452266
E-mail:service@bjzeping.com

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