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快速高爾基染色試劑盒(神經元和膠質細胞)使用說明書

瀏覽次數:6873 發布日期:2016-10-11  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

Golgi-Cox浸染法是研究神經元和膠質細胞正常和非正常形態最有效的方法之一。使用Golgi技術,在藥物處理過的動物腦中和因神經疾病死亡的病人腦中發現了神經樹突和樹突棘微小的形態改變。然而Golgi染色法不可靠且費時,成為這種方法廣泛應用的障礙。

FD Rapid GolgiStainTM Kit(FD快速Golgi染色試劑盒) 是根據Ramon-Moliner, Glaser2和Van der Loos5所闡述的方法的原則設計的。這個試劑盒不僅極大改進并簡化了Golgi-Cox技術,而且被證實在顯示神經元和膠質細胞,特別是樹突棘的形態細節上極為靈敏可靠。FD Rapid GolgiStainTM Kit已被廣泛測試并用于數種動物腦及去世病人的腦。

使用步驟:

一、組織制備

  1. 殺死動物之前對實驗動物進行深度麻醉。應盡快地從顱骨中取出動物的腦(或死去病人的腦),但操作時必須非常小心以免損傷或壓迫組織。

  2. 用雙蒸水或 Milli-Q 水快速沖掉組織表面的血液。

3. 把組織浸泡在由溶液 A 和 B 等體積混合的浸漬液中,室溫下黑暗保存兩周。浸泡 6 個小時以后或次日更換新的浸漬液。

4. 轉移組織到溶液 C 中室溫黑暗至少 72 小時(可長達 1 周)。 24 小時后或次日至少更換一次溶液。

5. 在-20℃到-22℃的條件下用冷凍切片機將組織切成 100-200 um 厚的薄片。也可用其它型號的顯微鏡薄片切片機包括滑動切片機和振動切片機。用樣本回收器(試劑盒提供)把樣本轉移到含有溶液 C(試劑盒所提供的滴瓶是方便溶液 C 滴到載玻片上)的明膠包被的顯微鏡載玻片上。載玻片上多余的溶液用吸管吸走并用濾紙吸干(載玻片上的溶液必須盡可能地吸干否則切片將從載玻片上脫落下來)。切片可以室溫下自然風干(不能用電風扇或電熱板使其干燥)。為取得最佳結果,應盡快地完成切片,制備好的切片如果保存于載玻片盒中,室溫黑暗條件下最長可保存 3 天。

二、染色步驟

  1. 用雙蒸水或 Milli-Q 水沖洗切片兩次,每次 4 分鐘。

2. 把切片置于由 1 份溶液 D, 1 份溶液 E 和 2 份的雙蒸水或 Milli-Q 水組成的混合液中 10 分鐘。

3. 用蒸餾水或 Milli-Q 水沖洗切片兩次,每次 4 分鐘(蒸餾水應頻繁更換新的)。

4. 用結晶紫或硫堇對切片進行復染(可選步驟)。

5. 在 50%, 75%和 95%的乙醇中對切片進行脫水,每個濃度梯度脫水 4 分鐘(不要跳過任何一個步驟)。

6. 然后在無水乙醇中對切片進行脫水, 4 次,每次 4 分鐘(不要延長時間)。

7. 在二甲苯中透明, 3 次,每次 4 分鐘,并且用樹脂封片劑對蓋玻片進行封片。

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