左旋咪唑是一種合成驅(qū)蟲藥，廣泛應(yīng)用于獸醫(yī)學(xué)中，用于治療由線蟲引起的寄生蟲感染。作為一種驅(qū)蟲藥，它以線蟲乙酰膽堿離子通道受體為靶點(diǎn)(Martin等)。除了醫(yī)學(xué)應(yīng)用外，左旋咪唑還廣泛應(yīng)用于各個(gè)研究領(lǐng)域，特別是秀麗隱桿線蟲麻痹實(shí)驗(yàn)。它能誘導(dǎo)這些線蟲癱瘓，這對(duì)于研究神經(jīng)元功能和肌肉生理學(xué)來說是無價(jià)的。為了深入了解毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)，我們?cè)谙旅媾e一個(gè)利用這種化合物的例子。研究人員可以利用這個(gè)例子作為一個(gè)框架，使用不同的可溶性藥物進(jìn)行他們自己的毒性研究。

材料:
帶蓋6孔板，NGM培養(yǎng)基，M9緩沖液，左旋咪唑-原液:100mM水溶，同步成蟲種群，WMicrotracker Arena設(shè)備。

簡易操作：

 
微孔板制備:

• 按照標(biāo)準(zhǔn)程序制備NGM；
• 在加入鹽和膽固醇后將左旋咪唑立即加入55°C的NGM瓊脂溶液中；
• 左旋咪唑片未接種OP50中；
• 制備后兩周內(nèi)可使用，保存在4°C的容器中；
• 測定是在實(shí)驗(yàn)開始前已將模板降到室溫的板上進(jìn)行的。

 
Protocol步驟:

1，在NGM培養(yǎng)皿中培養(yǎng)同步的成蟲種群(OP50)；
2，用M9緩沖液將蠕蟲從培養(yǎng)皿中取出，轉(zhuǎn)移到15毫升無菌試管中；
3，讓蟲子靜下來。倒入上清液，注意不要擾亂顆粒；
4，用5ml M9緩沖液進(jìn)行清洗。短暫搖動(dòng)或翻轉(zhuǎn)管子；
5，重復(fù)上述步驟。倒出上清，加入3ml M9緩沖液；
6，數(shù)一式三份，計(jì)數(shù)每10ul中蟲數(shù)，計(jì)算平均值；
7，制備懸浮液，得到[35蟲/10μl]；
8，將10 μl蟲液轉(zhuǎn)移至6孔板；
9，使用wMicroTracker ARENA觀察蠕蟲活動(dòng)；

備注:至少進(jìn)行3次技術(shù)重復(fù)，至少進(jìn)行2次生物重復(fù)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖所示：

左旋咪唑?qū)�N2運(yùn)動(dòng)活性的劑量抑制反應(yīng)曲線

評(píng)價(jià)不同濃度左旋咪唑(0µM(對(duì)照)、100µM和200µM)的治療效果。在6孔板中，每孔挑選35個(gè)年輕成蟲N2。在23℃下記錄4小時(shí)的運(yùn)動(dòng)活動(dòng)。數(shù)據(jù)代表四個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均值，進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)。

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