免疫細胞療法，特別是CAR-T細胞療法，利用人體免疫系統對抗疾病，尤其是癌癥。CAR-T細胞是經過基因修飾的T細胞，旨在靶向并摧毀癌細胞。在CAR-T的制造過程中，EVE™ HT FL等高通量熒光細胞計數儀起著至關重要的作用。它們評估細胞活力、計數CAR-T細胞、確保原材料的質量控制、優化培養條件、確定最佳收獲時間、檢測污染物，并為符合監管要求的數據記錄提供便利，從而提高CAR-T生產的效率和質量。

EVE™ HT FL提高了CAR-T療法的生產效率和質量，為這種個性化免疫療法的成功作出了貢獻。

細胞療法：組織細胞療法、免疫細胞療法和干細胞療法

細胞療法包括組織細胞療法、免疫細胞療法和干細胞療法。在生物醫學領域，它們作為獨立的領域而存在，細胞療法進一步分為組織細胞療法、免疫細胞療法和干細胞療法。另一方面，基因治療被分為免疫細胞基因治療和干細胞基因治療。本文將重點討論免疫細胞療法，特別是CAR-T療法，以及如何在CAR-T生產中應用高通量熒光細胞計數儀，如 EVE™ HT FL。
 

圖1 生物醫學分類

什么是免疫細胞療法？

免疫細胞療法，也稱為免疫療法，是一種利用身體免疫系統來對抗疾病的醫學方法，尤其是癌癥和免疫相關疾病。這種個性化治療包括從患者體內提取免疫細胞，在實驗室中對其進行基因改造以增強其靶向能力，然后將它們重新引入患者的血液中。其應用擴展到新藥開發、毒理學檢測和生物標志物研究。其中一個典型的例子就是CAR-T細胞療法，即通過工程改造使T細胞專門靶向并摧毀癌細胞。免疫細胞療法提供針對個體免疫狀況量身定制的精準醫學，并已在某些癌癥中顯示出顯著的療效，為治療以前具有挑戰性的疾病開辟了新的可能性。當前的研究旨在擴大其適用性并優化安全性和有效性。
 

圖2 CAR-T細胞療法

 

什么是CAR-T細胞？
CAR-T細胞是經過基因修飾以產生人工T細胞受體的T細胞。這種創新的免疫療法旨在增強T細胞識別和消除癌細胞的能力。該過程包括從個體中提取T細胞，對其進行基因改變，然后將工程化的CAR-T細胞重新引入患者體內，以更有效地靶向和摧毀腫瘤。這些CAR-T細胞既可以來自患者自身的血液(自體)，也可以來自健康供者的T細胞(同種異體)。為了確保安全，CAR-T細胞旨在特異性識別存在于腫瘤上但不識別健康細胞上的抗原。
 

圖3 CAR-T細胞療法

EVE™ HT FL：CAR-T產品的高效、準確和高通量解決方案
當處理PBMC或T細胞等細胞時，準確評估細胞濃度和活力對于在后續操作中保持質量至關重要。由于紅細胞和非細胞碎片等常見污染物，這類樣品中的細胞計數成為一項具有挑戰性的任務，引入了耗時、主觀性和更高的錯誤可能性等復雜性。
 

圖4 EVE™ HT FL

 

當處理PBMC或T細胞等細胞時，準確評估細胞濃度和活力對于保持后續程序的質量至關重要。由于紅細胞和非細胞碎片等常見污染物，這類樣品中的細胞計數成為一項具有挑戰性的任務，引入了時間消耗、主觀性和更高的錯誤可能性等復雜性。
 

EVE™ HT FL是一款高通量自動熒光細胞計數儀，配備明場和兩個熒光通道（AO/DAPI）。
 

AO和DAPI是熒光染料，可對靶細胞的細胞核進行染色。AO是一種可滲透的染料，無論細胞狀況如何，都可以對所有細胞的細胞核進行染色。DAPI是一種不滲透性染料，僅對膜受損的非活性細胞的細胞核進行染色。
 

圖5 EVE™ HT FL的基本計數原理

 

為了準確評估PBMC或干細胞等細胞類型的活力，建議使用雙熒光染色。該方法可有效排除樣品中的無核細胞（例如紅細胞）、血小板和碎片。在短短3分鐘內，可對多達48個樣品進行計數和分析。
 

EVE™ HT FL如何應用于CAR-T的制造過程？
當處理PBMC或T細胞等細胞時，準確評估細胞濃度和活力對于保持后續程序的質量至關重要。由于紅細胞和非細胞等常見污染物，這些樣品中的細胞計數成為一項具有挑戰性的任務。

 
1. 細胞活力評估

EVE™ HT FL是一款高通量熒光細胞計數儀，能夠快速準確地測定活CAR-T細胞的百分比，即實時監測細胞活力。此外，它還可以實時監測細胞生長和增殖。在CAR-T生產中通常需要大量T細胞，這種能力對于確保最終CAR-T產品的整體質量至關重要。通過跟蹤這些參數，研究人員可以優化培養條件，以確保產生足夠數量的活CAR-T細胞。

 
2. CAR-T細胞計數

EVE™ HT FL簡化了CAR-T細胞的計數過程。通過自動細胞計數，它擅長計數總細胞計數，包括活細胞和非活細胞，進一步促進了細胞濃度的測定。這允許在制造過程的各個階段準確接種細胞。這對于保持所需的細胞密度和優化下游工藝至關重要。

 
3. 起始材料的質量控制

CAR-T療法的成功在很大程度上取決于起始T細胞群的質量。EVE™ HT FL有助于全面評估細胞形態、大小和整體質量。確保起始T細胞符合預定標準對于一致和有效的CAR-T生產至關重要。

 
4. 優化培養條件

對細胞培養物的持續監測有助于深入了解不同培養條件對CAR-T細胞生長和健康的影響。研究人員可以使用這些信息來優化培養基組成、孵育參數和其他變量，從而提高CAR-T細胞的生產效率。

 
5. 確定最佳收獲時間

EVE™ HT FL有助于確定CAR-T細胞的最佳收獲時間。通過在培養期間監測細胞活力，研究人員可以確定細胞表現出最大活力且最適合收獲的時間點，從而優化整體生產時間表。

 
6. 檢測污染物或異常

AO/DAPI染色可以突出顯示細胞群中的污染物或異常。可以快速識別細胞形態的偏差或不需要的細胞類型的存在，從而可以采取糾正措施來保持CAR-T細胞產品的純度。

 
結論

EVE™ HT FL可以應用于CAR-T生產，提供評估細胞活力、計數細胞計數、監測細胞生長和確保CAR-T細胞產品整體質量的功能。其高通量特性有助于提高生產過程的效率和成功，最終影響CAR-T細胞療法的治療效果。