對激酶活性進行準確的檢測依賴于精準地加入特定濃度、體積和次數(shù)的試劑、底物和抑制劑。Myra迷你自動化工作站能夠提供無可比擬的分液精度，減少人工干預，實現(xiàn)人為誤差最小化，從而徹底變革激酶分析的操作。

Myra的主要特點 

Myra可通過編程來處理復雜的常規(guī)分液操作，包括通過倍比稀釋制備底物或抑制劑的濃度梯度，這對于動力學分析和抑制劑表征分析至關(guān)重要。高精度地對低至2ul體積的液體快速執(zhí)行這些常規(guī)操作的能力直接影響采集獲得的數(shù)據(jù)的質(zhì)量和可靠性。

Myra可運行的激酶檢測類型

• ADP-Glo 激酶檢測（ADP-Glo Kinase Assay）， 測量由激酶反應隨時間而產(chǎn)生的腺苷二磷酸（adenosine diphosphate，ADP）的化學發(fā)光檢測方法 

• 時間分辨熒光共振能量轉(zhuǎn)移（Time-Resolved Fluorescence Resonance Energy Transfer，TR-FRET），是靈敏可靠的熒光檢測技術(shù)，結(jié)合了時間分辨熒光和熒光共振能量轉(zhuǎn)移的原理，能使背景信號最小化，同時最大化信噪比。

Myra用于激酶檢測的優(yōu)勢

Myra 可 確保反應條件被高度一致地復制，從而促進生成米氏分析（Michaelis-Menten analysis）所必須的數(shù)據(jù)。這種一致性可以在不同的底物濃度條件下精準確定反應速度，這對于繪制Michaelis-Menten 曲線及計算動力學參數(shù)至關(guān)重要。

Myra可以快速穩(wěn)定地檢測一系列濃度范圍的大量化合物，從而高通量篩選激酶抑制劑。這一能力在藥物發(fā)現(xiàn)的早期非常寶貴，因為篩選的效率能夠顯著影響潛在的候選藥物確認的速度。

小結(jié) 

Myra的先進性和高性能使其成為激酶檢測方案和動力學分析必不可少的儀器。通過Myra能夠?qū)�激酶抑制劑進行更準確、更高效和更高通量的篩選，在促進藥物開發(fā)中的作用怎么強調(diào)都不為過。對于這一領(lǐng)域的研究者來說，采用Myra代表著對實驗工作流程的質(zhì)量和效率的戰(zhàn)略性投資。

應用示例：Promega ADP-Glo Kinase.

ADP-Glo Kinase 時間進程實驗用來確定以多肽作底物的激酶的動力學

Myra激酶檢測方案

典型的 ADP-Glo™ 激酶檢測流程始于激酶反應，在ATP存在的條件下，激酶使底物磷酸化。隨后加入 ADP Glo™ 試劑終止激酶反應并消耗剩余的ATP，準備用于ADP檢測的體系。最后，激酶檢測試劑將ADP轉(zhuǎn)化回ATP，后者通過化學發(fā)光信號進行定量。采用Myra實現(xiàn)流程自動化，能夠保證每一個步驟都精確地計時并執(zhí)行，從而確保多個板和孔之間的分析完整性和一致性。 

實驗方案 

ADP-Glo 激酶分析：多肽按1:2 稀釋，總體積2 uL。將多肽在384孔板上稀釋，隨后加入2 uL 激酶。5分鐘后加入4ul終止液。系統(tǒng)性加入反應組分需要考慮特定的所需時間，以保證精確地加入終止液。標準品為三個重復。繪制ADP標準曲線以計算ATP至ADP的轉(zhuǎn)化。 

ADP標準曲線，用于確定酶底物的轉(zhuǎn)化

底物濃度曲線：對ADP的量作圖，生成每個時間段的反應曲線。.

確認每個酶稀釋度在每個時間點的反應速度，并繪制Michaelis-Menten 曲線
 

Michaelis-Menten方程通過將反應速度與酶和底物濃度相關(guān)聯(lián)來描述酶反應的速度。從這些分析得到的準確的動力學參數(shù)（Vmax and Km）對準確闡明激酶活性和抑制劑效率至關(guān)重要。

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