熒光細胞成像觀察方法分享
活細胞熒光成像通常在熒光顯微鏡下觀察結果，該方法步驟繁瑣，只能觀察最終實驗結果，那么有什么新方法可以彌補這種不足呢？
本文將介紹一種新方法——使用活細胞成像分析系統，置于培養箱內實時動態成像，監測細胞熒光變化情況。我們分析了使用活細胞成像分析系統的方法對比常用方法的優勢，同時列舉了幾篇活細胞成像分析系統應用在細胞熒光成像方向的高分文章，新方法獲得了科研人員的認可，在熒光成像實驗中被廣泛使用。
細胞是生命活動的基本結構和功能單位，對活細胞中特定生物組分進行動態分析，將為相關生命活動過程的研究提供重要信息。
熒光成像是基于熒光顯微鏡的一種分子成像技術，可實時監測細胞微觀動態分子過程，具有直觀、無損、高靈敏度、高分辨率等顯著優點。研究者通過熒光成像可觀察細胞動態變化過程并隨時間追蹤細胞生物分子和結構，更好觀察細胞凋亡、傷口愈合、細胞轉染、免疫細胞殺傷、神經突生長等過程。
傷口愈合結果圖（GFP&RFP表達）
熒光成像技術是觀察和分析離子以及氨基酸和蛋白質等生物大分子定位和動態的強大工具。熒光蛋白（FPs）經常被用作熒光指示劑，功能性FPs可以通過引入編碼融合蛋白的基因與目標蛋白或多肽一起表達出來。熒光成像試劑除了熒光蛋白外，還可以選擇熒光探針或者熒光染液。
傳統的活細胞熒光成像觀察，將消化下來的細胞接種培養至合適密度后，加入熒光染料共同孵育一段時間后更換新的培養基，在熒光顯微鏡下觀察成像結果。人工在顯微鏡下拍攝熒光圖像，無法監測實驗全過程，獲得分析數據有限，且頻繁取出細胞樣本耗時耗力，改變了細胞培養環境。
那么有什么新工具可以彌補這些不足，助力于活細胞熒光成像實驗呢？
奎克泰生物的JuLI™系列實時活細胞成像分析系統能夠為活細胞熒光成像實驗提供所需要的工具。JuLI™系列設備操作簡單，無需復雜人工操作，省時省力；無需頻繁取出樣本觀察，提供穩定的生長環境；實時觀察，延時記錄，全面呈現類器官培養情況，獲取大量數據進行分析。JuLI™ FL配備GFP/RFP熒光通道，JuLI™ Stage配備GFP、RFP與DAPI三色熒光通道，可實時熒光成像和延時拍攝，基于圖像軟件，可檢測熒光強度。
本文將介紹一種新方法——使用活細胞成像分析系統，置于培養箱內實時動態成像，監測細胞熒光變化情況。我們分析了使用活細胞成像分析系統的方法對比常用方法的優勢，同時列舉了幾篇活細胞成像分析系統應用在細胞熒光成像方向的高分文章，新方法獲得了科研人員的認可，在熒光成像實驗中被廣泛使用。
細胞是生命活動的基本結構和功能單位，對活細胞中特定生物組分進行動態分析，將為相關生命活動過程的研究提供重要信息。
熒光成像是基于熒光顯微鏡的一種分子成像技術，可實時監測細胞微觀動態分子過程，具有直觀、無損、高靈敏度、高分辨率等顯著優點。研究者通過熒光成像可觀察細胞動態變化過程并隨時間追蹤細胞生物分子和結構，更好觀察細胞凋亡、傷口愈合、細胞轉染、免疫細胞殺傷、神經突生長等過程。
傷口愈合結果圖（GFP&RFP表達）
熒光成像技術是觀察和分析離子以及氨基酸和蛋白質等生物大分子定位和動態的強大工具。熒光蛋白（FPs）經常被用作熒光指示劑，功能性FPs可以通過引入編碼融合蛋白的基因與目標蛋白或多肽一起表達出來。熒光成像試劑除了熒光蛋白外，還可以選擇熒光探針或者熒光染液。
傳統的活細胞熒光成像觀察，將消化下來的細胞接種培養至合適密度后，加入熒光染料共同孵育一段時間后更換新的培養基，在熒光顯微鏡下觀察成像結果。人工在顯微鏡下拍攝熒光圖像，無法監測實驗全過程，獲得分析數據有限，且頻繁取出細胞樣本耗時耗力，改變了細胞培養環境。
那么有什么新工具可以彌補這些不足，助力于活細胞熒光成像實驗呢？
奎克泰生物的JuLI™系列實時活細胞成像分析系統能夠為活細胞熒光成像實驗提供所需要的工具。JuLI™系列設備操作簡單，無需復雜人工操作，省時省力；無需頻繁取出樣本觀察，提供穩定的生長環境；實時觀察，延時記錄，全面呈現類器官培養情況，獲取大量數據進行分析。JuLI™ FL配備GFP/RFP熒光通道，JuLI™ Stage配備GFP、RFP與DAPI三色熒光通道，可實時熒光成像和延時拍攝，基于圖像軟件，可檢測熒光強度。
JuLI™ FL雙色熒光通道圖
JuLI™ Stage三色熒光通道圖
研究者可以預先設定好拍攝參數，通過延時攝影監測并評估細胞熒光成像情況，提供細胞熒光強度量化結果。對比常規細胞熒光成像檢測方法，活細胞成像分析系統大大縮減了人工操作的繁瑣性、提高了實驗結果的準確性、成功率，省時省力，為研究人員帶來了便利。
以下來自世界各地知名機構發布的幾篇文章，均為使用JuLI™系列活細胞成像分析系統做的細胞熒光成像實驗。
細胞增殖結果
Neuro-2a細胞轉染結果
EBV LCLs細胞凋亡檢測
參考文獻：
[1]Chang HK, Kim PH, Kim DW, Cho HM, Jeong MJ, Kim DH, Joung YK, Lim KS, Kim HB, Lim HC, Han DK, Hong YJ, Cho JY. Coronary stents with inducible VEGF/HGF-secreting UCB-MSCs reduced restenosis and increased re-endothelialization in a swine model. Exp Mol Med. 2018 Sep 3;50(9):1-14. （IF12.8）
[2]Radwan M, Ang CS, Ormsby AR, Cox D, Daly JC, Reid GE, Hatters DM. Arginine in C9ORF72 Dipolypeptides Mediates Promiscuous Proteome Binding and Multiple Modes of Toxicity. Mol Cell Proteomics. 2020 Apr;19(4):640-654.（IF7）
[3]Han C, Sim SJ, Kim SH, Singh R, Hwang S, Kim YI, Park SH, Kim KH, Lee DG, Oh HS, Lee S, Kim YH, Choi BK, Kwon BS. Desensitized chimeric antigen receptor T cells selectively recognize target cells with enhanced antigen expression. Nat Commun. 2018 Feb 1;9(1):468.（IF16.6）
JuLI™ Stage三色熒光通道圖
研究者可以預先設定好拍攝參數，通過延時攝影監測并評估細胞熒光成像情況，提供細胞熒光強度量化結果。對比常規細胞熒光成像檢測方法，活細胞成像分析系統大大縮減了人工操作的繁瑣性、提高了實驗結果的準確性、成功率，省時省力，為研究人員帶來了便利。
以下來自世界各地知名機構發布的幾篇文章，均為使用JuLI™系列活細胞成像分析系統做的細胞熒光成像實驗。
- 韓國首爾大學獸醫科學研究所生物化學系的研究人員在《Experimental & Molecular Medicine》期刊發表題為 ''Coronary stents with inducible VEGF/HGF-secreting UCB-MSCs reduced restenosis and increased re-endothelialization in a swine model ''的文章。研究人員將分泌HGF和VEGF的人臍帶血源性間充質干細胞（U-Ms）接種到預涂覆材料片上，以確認細胞在支架材料上的生存能力。用JuLI™ FL檢測并記錄綠色熒光染料染色的細胞，數據表明Dox能夠增強分泌HGF和VEGF的U-Ms細胞增殖。
細胞增殖結果
- 來自墨爾本大學生物化學與分子生物學和Bio21分子科學與生物技術研究所的研究人員聯合在《Molecular & Cellular Proteomics》發表的題為 ''Arginine in C9ORF72 Dipolypeptides Mediates Promiscuous Proteome Binding and Multiple Modes of Toxicity' 的文章。研究人員研究富含精酸的DPR引起的疾病毒性的新機制。Neuro-2a細胞與單個GFP標記的DPR和mCherry載體共轉染24小時后更換培養基，然后使用JuLI™ Stage活細胞成像系統對細胞進行縱向成像，每間隔15min拍攝一次，共記錄96h。
Neuro-2a細胞轉染結果
- 來自韓國國立癌癥中心免疫治療科的研究人員在《Nature Communications》發表題為 'Desensitized chimeric antigen receptor T cells selectively recognize target cells with enhanced antigen expression' 的文章，研究人員應用了細胞凋亡試劑盒，使用JuLI™ Stage測定EBV LCLs細胞凋亡動力學。研究表明CD19 CAR T和MVR CAR T細胞逐漸增加了EBV LCLs細胞凋亡比例。每5min拍攝一次DAPI和RFP熒光圖像，持續記錄90min。
EBV LCLs細胞凋亡檢測
參考文獻：
[1]Chang HK, Kim PH, Kim DW, Cho HM, Jeong MJ, Kim DH, Joung YK, Lim KS, Kim HB, Lim HC, Han DK, Hong YJ, Cho JY. Coronary stents with inducible VEGF/HGF-secreting UCB-MSCs reduced restenosis and increased re-endothelialization in a swine model. Exp Mol Med. 2018 Sep 3;50(9):1-14. （IF12.8）
[2]Radwan M, Ang CS, Ormsby AR, Cox D, Daly JC, Reid GE, Hatters DM. Arginine in C9ORF72 Dipolypeptides Mediates Promiscuous Proteome Binding and Multiple Modes of Toxicity. Mol Cell Proteomics. 2020 Apr;19(4):640-654.（IF7）
[3]Han C, Sim SJ, Kim SH, Singh R, Hwang S, Kim YI, Park SH, Kim KH, Lee DG, Oh HS, Lee S, Kim YH, Choi BK, Kwon BS. Desensitized chimeric antigen receptor T cells selectively recognize target cells with enhanced antigen expression. Nat Commun. 2018 Feb 1;9(1):468.（IF16.6）
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