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溶瘤病毒、質(zhì)粒/病毒載體的生產(chǎn)工藝及流程

瀏覽次數(shù):1207 發(fā)布日期:2024-1-26  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

基因治療,也稱為細(xì)胞和基因治療(Cell and GeneTherapy),是一種利用基因治療載體將外源治療性基因轉(zhuǎn)導(dǎo)至細(xì)胞,再通過外源基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯,改變細(xì)胞原有基因表達(dá)從而達(dá)到治療疾病的目的。目前,國內(nèi)基于基因治療的生產(chǎn)工藝主要涉及兩個方向,第一類即基于溶瘤病毒進(jìn)行相關(guān)藥物開發(fā),第二類即基于質(zhì)粒/病毒載體介導(dǎo)的基因療法。
 

溶瘤病毒不僅可以發(fā)揮直接由病毒介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞殺傷功能,也能通過破壞腫瘤血管系統(tǒng)從而達(dá)到間接殺傷腫瘤的目的。對于基因治療中的腺病毒AAV載體,其能夠長期存在于未分裂、最終分化的細(xì)胞群中而不被細(xì)胞當(dāng)做外源DNA降解,從而達(dá)到藥物遞送的作用。慢病毒LV載體則可以將外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色體上,從而達(dá)到持久性表達(dá)目的序列的效果。
 

目前已上市的藥物中以AAV作為載體的代表性藥物例如諾華治療脊髓性肌萎縮癥(SMA)的Zolgensma,上市以來也取得了顯著反向,商業(yè)化較為成功。接下來就讓我們來看一下不同病毒的生產(chǎn)工藝吧!

 

 

01

溶瘤病毒生產(chǎn)工藝

病毒工藝開流程
 

 

02

質(zhì)粒/病毒載體生產(chǎn)工藝

一 慢病毒質(zhì)粒構(gòu)建流程
 


二 腺病毒質(zhì)粒構(gòu)建流程
 

 

三 腺相關(guān)病毒質(zhì)粒構(gòu)建
 

 

在上游細(xì)胞培養(yǎng)過程中,培養(yǎng)工藝不同會導(dǎo)致病毒產(chǎn)量或質(zhì)量的不同,目前對于細(xì)胞培養(yǎng)的工藝主要分為貼壁工藝及懸浮工藝。貼壁工藝是目前市場上主流的生產(chǎn)工藝,主要有細(xì)胞工廠、固定床、微載體工藝等。而懸浮工藝主要受限于細(xì)胞系和培養(yǎng)基,但易于放大,是較為理想的工業(yè)化生產(chǎn)模式。
 


胰酶作為細(xì)胞貼壁工藝中的關(guān)鍵物料之一,酶活性、有無動物源等因素均至關(guān)重要。逐典TryPLUS消化液作為體外重組表達(dá)的胰酶類似物,與傳統(tǒng)胰酶的消化動力學(xué)相似,但區(qū)別與傳統(tǒng)胰酶,具有純度高,細(xì)胞毒性低,細(xì)胞消化溫和等特點(diǎn),產(chǎn)品無動物源性,無需胰酶抑制劑,稀釋即可進(jìn)行終止,并且能夠兼容多種細(xì)胞培養(yǎng)體系,定能成為您細(xì)胞培養(yǎng)工藝中的絕佳幫手!

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