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SH-SY5Y細胞轉染方法介紹

瀏覽次數:1435 發布日期:2023-9-5  來源:蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司
  SH-SY5Y細胞是神經母細胞瘤細胞系中常用的模型系統,廣泛用于神經生物學和神經藥理學研究。轉染SH-SY5Y 細胞是一項重要的實驗技術,在基因功能研究、蛋白表達和定量分析等方面扮演著關鍵角色。然而,由于SH-SY5Y細胞的特殊性質,使用傳統轉染方法可能會遇到一些困難。因此,本文將介紹一種優化的SH-SY5Y 細胞轉染方法,并詳細描述每個步驟。
 材料與試劑:
- SH-SY5Y細胞系:可從Cell Bank of the Chinese Academy of Sciences或其他來源獲得。
- 細胞培養基:Dulbecco's Modified Eagle Medium(DMEM)/F12混合培養基。
- 熱穩定型胰酶:用于細胞的傳代與分離。
- 轉染試劑:例如,聚乙烯亞胺(PEI)、脂質體等。
- 目標基因的質粒DNA或siRNA:用于轉染和表達。
- Opti-MEM:用于稀釋轉染試劑和質粒。
 

優化方法:
一、準備SH-SY5Y細胞
1. 獲得SH-SY5Y細胞系并進行培養。
2. 在T25細胞培養瓶中分別加入10 ml完整的DMEM/F12培養基及10%胎牛血清(FBS)。
3. 將SH-SY5Y細胞從細胞凍存管中復蘇,并將細胞傳遞至培養瓶中。
4. 在37℃、5% CO2的培養箱中培養細胞,直至細胞達到80-90%的密度。
二、轉染前的預處理
1. 轉染前用DMEM/F12培養基含10% FBS對SH-SY5Y細胞進行預處理。
2. 將細胞培養至80-90%的密度。
3. 用1X PBS洗滌細胞2次,去除細胞內的殘留培養基。
三、轉染操作
1. 根據轉染試劑的使用說明,將轉染試劑稀釋至合適的濃度,如使用PEI轉染,可在Opti-MEM中稀釋PEI至最終濃度。
2. 在另一個離心管中將質粒DNA或siRNA按照使用的量稀釋至合適體積,并在Opti-MEM中混合均勻。
四、轉染操作步驟
1. 向細胞中加入預先稀釋好的轉染試劑,注意不要形成氣泡并避免細胞過度干擾。
2. 輕輕震蕩培養瓶,使轉染試劑均勻分布。
3. 將稀釋好的質粒DNA或siRNA加入到培養基中,與轉染試劑充分混合,避免形成沉淀。
4. 震蕩培養瓶并置于37℃的培養箱中進行培養。
5. 根據研究需求,在48-72小時后進行下一步實驗(如蛋白表達、基因敲除等)。
    本文詳細介紹了一種優化的SH-SY5Y細胞轉染方法。通過合適的細胞預處理步驟,并使用適當的轉染試劑和質粒DNA/siRNA濃度,可以實現高效且可重復的SH-SY5Y細胞轉染。值得指出的是,轉染條件可能因具體實驗目的而略有不同,因此每位研究者都應根據實驗需求進行適當的優化。這種優化后的轉染方法將有助于更好地理解SH-SY5Y細胞中的基因功能并推動神經科學研究的發展。
 
發布者:蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司
聯系電話:0512-62956104
E-mail:jie_wu@bioalpha.cn

標簽: SH-SY5Y細胞
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