細胞培養操作指南和注意事項

瀏覽次數：1383　發布日期：2023-4-19　來源：本站　僅供參考，謝絕轉載，否則責任自負

細胞培養

大神崛起計劃

剛接觸細胞培養的小白，生物實驗技術理論知識一堆，但真正到操作環節手忙腳亂，一堆“黑話”一頭霧水，常常不知從哪里下手。

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01 為什么要進行細胞體外培養

社會上習慣于把科學和技術連在一起，統稱為科學技術，簡稱科技。科學解決理論問題，技術解決實際問題。科技引領我們走向更好的生活；
現代生物技術一般認為包括基因工程技術、細胞工程技術、酶工程技術和發酵工程技術，而這些技術的發展幾乎都與細胞培養有密切關系；
醫藥領域（基因工程藥物或疫苗在研究生產過程中很多是通過細胞培養來實現）、基因工程（乙肝疫苗很多是以 CHO 細胞作為載體）、細胞工程（雜交瘤單克隆抗體，完全是通過細胞培養來實現），既使是現在飛速發展的基因工程抗體也離不開細胞培養；正在倍受重視的基因治療、體細胞治療也要經過細胞培養過程才能實現，發酵工程和酶工程有的也與細胞培養密切相關。

總之,細胞培養在整個生物技術產業的發展中起到了很關鍵的核心作用。

02 細胞培養基本概念

細胞培養
將活細胞（尤其是分散的細胞）在體外進行培養的方法稱為細胞體外培養。狹義的主要是指分離（散）細胞培養，廣義的還包括單（個）細胞培養又稱克隆，是指單個細胞通過有絲分裂形成的細胞群體。

原代細胞
初次培養。即培養物一經接種到培養皿中就不再分割，任其生長繁殖而不更換生長器皿。

傳代培養
隨著培養時間的延長、細胞不斷分裂繁殖，細胞之間相互接觸會發生接觸性抑制，生長速度逐漸減慢甚至停止。培養皿中營養物逐漸不足，代謝產物不斷累積，不利于細胞繼續生長。在這種情況下，需要將培養物分割成小的部分，重新接到培養器皿中進行再培養。

細胞系
原代細胞培養物經首次傳代培養后所繁殖的細胞群體。狹義的是指可連續傳代的細胞，廣義的是指可傳代的細胞。正常細胞通常只能分裂有限的次數，隨后就會喪失增殖的能力，這是一個由遺傳決定的事件，被稱為衰老。這種細胞系被稱為有限細胞系；一些細胞系會通過轉化的過程變為永生性細胞系，這一過程可自然發生，也可經化學或病毒誘導發生。有限細胞系發生轉化獲得無限分裂能力后就成為連續細胞系。

03 細胞培養的環境

細胞培養實驗室的主要要求是時時維持細胞培養工作區域處于無菌狀態，獲得無菌條件最簡單、經濟的方式就是使用細胞培養超凈臺。
細胞培養超凈臺應足夠一人使用，內外部均采用易清潔設計，具有充足的照明，使用舒適。
使用過程中需保持細胞培養超凈臺內工作空間整潔有序，將所有物品放在直視范圍內，便于取用。使用前向放入細胞培養超凈臺內的物品噴灑70%的乙醇，擦拭清潔，進行消毒。
細胞培養通超凈臺的物品擺放一般遵循以下右手使用習慣，可根據特殊實驗中增加的物品進行相應的適當改動。

超凈臺中部
擺放細胞培養類耗材。耐思細胞培養類耗材除了板、瓶、皿等常規耗材，更具備高品質大規模生物工藝器皿，規格全面，型號豐富。

超凈臺右前方
擺放移液耗材及器械，便于取用。耐思液體轉移類耗材多樣，移液吸頭、離心管、真空過濾器、血清移液管等應有盡有。

超凈臺右后方
擺放生物試劑和培養基，便于吸取。耐思生物試劑類產品包含核酸提取與純化試劑、PCR/RT-PCR相關試劑、實驗室常規試劑、基因敲除試劑等。