比利時(shí)根特大學(xué)科學(xué)家研究降解神經(jīng)母細(xì)胞瘤（Neuroblastoma, NB）中極光激酶A（Aurora Kinase A，AURKA）靶點(diǎn)，AUKAR在有絲分裂中具有催化功能，同時(shí)穩(wěn)定關(guān)鍵癌蛋白MYCN，是公認(rèn)的NB藥物靶點(diǎn)。

作者通過探索不同接頭子Linker長(zhǎng)度，及4和5位作為沙利度胺出口載體的MK-5108衍生的PROTAC構(gòu)效關(guān)系。

結(jié)果表明，PROTAC SK2188可誘導(dǎo)AURKA最高效的降解，24h條件下DC50<10 nM，1h時(shí)Dmax 98%和24h時(shí)Dmax 80%。

在細(xì)胞增殖藥物篩選實(shí)驗(yàn)和患者來(lái)源類器官中，SK2188作用效果顯著優(yōu)于母體抑制劑MK-5108。在NGP神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系水平實(shí)驗(yàn)中，會(huì)誘導(dǎo)伴隨的MYCN降解、DNA損傷水平和細(xì)胞凋亡。

將PEG連接子的結(jié)合位點(diǎn)設(shè)計(jì)到沙利度胺5位，同時(shí)連接子縮短到2個(gè)PEG單位，獲得的PROTAC分子能高效降解AURKA。

Digital Western（Simple Western）定量檢測(cè)AURKA降解水平變化

上圖數(shù)據(jù)結(jié)果表明，SK2188可實(shí)現(xiàn)有效且快速的AURKA靶蛋白降解。

采用毛細(xì)管Digital Western（即Simple Western）評(píng)估NGP細(xì)胞水平PROTAC作用效應(yīng)，采用10、100和1000 nM化合物處理24小時(shí)候，監(jiān)測(cè)AURKA倍數(shù)水平變化。除了4位點(diǎn)短的2 PEG單元SK3250外，其余所有PROTACs都誘導(dǎo)有效的劑量依賴性AURKA降解。

與其他研究相一致，使用母體抑制劑MK-5108治療導(dǎo)致AURKA蛋白水平增加近2倍，基于alisertib設(shè)計(jì)JB170表現(xiàn)出較弱的降解活性。進(jìn)一步驗(yàn)證說(shuō)明，蛋白酶體抑制劑處理后，可防止SK2188降解活動(dòng)，AURKA降解是由Cereblon介導(dǎo)的蛋白酶體依賴性作用機(jī)制。

AURKA抑制劑是神經(jīng)母細(xì)胞瘤治療模式活躍的領(lǐng)域，然而經(jīng)典抑制劑治療導(dǎo)致AURKA表達(dá)上調(diào)，導(dǎo)致臨床實(shí)踐中潛在治療抵抗相關(guān)，蛋白降解劑是一個(gè)有潛力的方向。

Digital Western可在細(xì)胞水平和類器官模型等不同層面評(píng)估AURKA蛋白降解情況，是此靶點(diǎn)蛋白降解劑開發(fā)的有力工具。

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參考文獻(xiàn)：

1. https://chemrxiv.org/engage/chemrxiv/article-details/62fdcb04ceed6f39f132cc62