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親和層析法和凝膠過濾層析法對蛋白質進行分離純化的原理

瀏覽次數:5405 發布日期:2022-9-1  來源:蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司
蛋白純化介質主要應用于研究目的蛋白的結構、功用以及相互作用的和過程中。比如:在蛋白純化過程中,由于親和層析法的選擇性和結合力較強,分辨率也高,所以,親和層析法是一種常用的蛋白、抗體純化方法。


親和層析法的原理
親和層析法是利用生物大分子與一些相應的特定分子之間的特異性識別和可逆結合的特點,分離生物大分子的一種方法。親和層析是一種行之有效的蛋白質純化方法,通常可以通過一步處理就能獲得高純度的蛋白質。蛋白質可以根據它們對特定配體的特異性而不是它們共價結合的能力來分離。

凝膠過濾層析法又稱分子篩層析法,它是通過凝膠介質過濾的作用進行蛋白質分離和純化,當樣本流經葡聚糖凝膠介質或瓊脂糖凝膠填料時,會根據樣品的大小和形狀對流經的蛋白進行分離,從而獲得具有一定純度的目的蛋白進行下游應用。

葡聚糖凝膠
交聯葡聚糖凝膠是葡聚糖通過環氧氯丙烷交聯而成的球形凝膠。交聯劑環氧氯丙烷的兩個基團分別與兩個葡聚糖殘基上的游離羥基反應,使葡聚糖分子在分子內或分子間發生交聯,形成網狀結構的微球。葡聚糖是水溶性的,與葡聚糖凝膠交聯,不溶于水,具有一定的抗壓強度。可直接用于凝膠色譜。合成交聯葡聚糖時,凝膠的交聯度和目數由糖的濃度和交聯劑的用量和反應條件決定,所以填料的抗壓強度和排阻能力也是限定的。

小葡聚糖凝膠(G-10、G-15、G-25、G-50)主要用于脫鹽、多肽等小分子的分離。一般分子量在100萬以上的大分子不能用葡聚糖凝膠,用瓊脂糖凝膠,凝膠型號G后面的數字大致表示10g型凝膠有吸水值(ML)。

葡聚糖凝膠過濾介質主要有以下幾種:
Smartdex G-10
Smartdex G-15
Smartdex G-25
PreCap Desalting
Prepacked Desalting Column
SpinDesalt Column
Smartdex G-50
Smartdex G-75
Smartdex G-100
Smartdex LH-20

瓊脂糖凝膠
瓊脂糖是從海洋紅藻中提取的天然高分子化合物,β-D-半乳糖與3,6-脫水-L-半乳糖交替連接。β- D-半乳糖和3,6-脫水-l-半乳糖之間的β(1→4)糖苷鍵,而3,6-脫水-L-半乳糖和β-D-半乳糖之間的α(1→3)糖苷鍵鍵連接。瓊脂糖在室溫下是固體。加熱到45度以上時溶于水。當熱的瓊脂糖溶液(糖濃度為2%~16%)冷卻后,鏈狀分子之間形成雙螺旋,進一步自發聚集成束狀結構,形成多孔的三維網絡瓊脂糖凝膠。

凝膠的平均孔徑隨糖溶液的濃度而變化,糖濃度大,凝膠的平均孔徑小。高流量瓊脂糖凝膠可承受高達0.3~0.4MPa的壓力,基本滿足大規模蛋白純化分離的需要。

瓊脂糖凝膠過濾介質主要包含以下幾種:
Smartarose 4B
Smartarose 6B
Smartarose CL-4B
Smartarose CL-6B
Smartarose 4FF
Smartarose 6FF
Smac Beads

蘇州阿爾法生物提供的瓊脂糖凝膠介質、葡聚糖凝膠介質等蛋白純化和分離填料以及相關生物試劑。另外還提供、組氨酸標簽蛋白親和純化介質、GST-tag蛋白親和純化介質、 MBP-tag蛋白親和純化介質、生物素Biotin-tag蛋白親和純化介質、Strep-tagll標簽親和純化介質、 標簽抗體親和純化介質等標簽蛋白親和層析介質;離子交換層析介質、疏水層析介質、 磁性微球等。
發布者:蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司
聯系電話:0512-62956104
E-mail:jie_wu@bioalpha.cn

標簽: 蛋白質純化
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