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臺盼藍、AO/PI熒光計數、明場計數染色法區別及所適用細胞樣品類型

瀏覽次數:26706 發布日期:2021-5-12  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
在細胞實驗中,細胞濃度、活率的檢測是最基礎的一步,不同類型的細胞適用不同的染色方法。 

最常見的計數方法是臺盼藍染色原理,這種跨膜染料通過觀察活死細胞形態來判斷細胞活率,中心透亮未著色的為活細胞,被著色呈現實心的為死細胞。近年來隨著細胞治療行業的進步,臺盼藍染色原理已經不能滿足復雜的細胞樣品的計數,比如原代細胞中的碎片、PBMC中殘留的紅細胞血小板等雜質碎片、培養后期的細胞,尤其在干細胞、CAR-T、NK等細胞治療領域臺盼藍計數方法的缺陷尤為突出。

圖1 臺盼藍染色原理檢測不同階段的細胞

隨之衍生出的AO/PI熒光計數方法(前幾期有普及過),采用核酸特異性標記原理,AO(吖啶橙,小分子染料,488激發,525發射)標記細胞核酸發綠色熒光,PI(碘化丙啶,大分子染料,535激發,600發射)標記死細胞核酸發紅色熒光,根據活死細胞熒光不同直接排除雜質碎片的干擾,彌補了臺盼藍的不足。AO/PI熒光計數方法在干細胞、CAR-T、NK等細胞治療領域廣受科研工作者的喜愛。

圖2 臺盼藍和AO/PI熒光方法檢測不同階段的細胞
 
針對常規傳代培養的細胞和比較復雜的細胞都有了相應的計數方法,幫助我們準確分析細胞的濃度、活率、平均直徑等等,還有一類細胞是需要借助紙片微載體培養的,這類細胞的生長成球狀,很難實現在線計數,需要借助專門的裂解液,使細胞裂解后得到裸核,通過檢測裸核實現細胞濃度的檢測,但是這種裂解液對臺盼藍和熒光試劑均有影響,會使臺盼藍團成絮狀物,使AO/PI的熒光發生猝滅,這種細胞的裸核計數用最經典的臺盼藍和AO/PI熒光方法均無法實現。

圖3 裂解后的裸核臺盼藍染色視野和AO/PI熒光染色視野

面對這種細胞我們Rigel除了臺盼藍活率計數、AO/PI熒光計數法,還有第三種計數方法,細胞計數—明場計數法,這種方法針對只需要檢測細胞的生長濃度,不需要檢測活率的實驗,對于上述提到的紙片微載體培養后裂解的細胞,不需要染色液直接細胞樣品上樣即可實現細胞濃度計數。

圖4 細胞裂解后裸核的檢測

不同的細胞類型有不同的檢測方法,我們Countstar Rigel熒光細胞分析儀同時提供明場細胞計數、臺盼藍活率計數、AO/PI熒光法計數這三種方法,配備CCD高清攝像頭,獲取細胞真實的濃度,滿足細胞實驗檢測需求。
發布者:上海睿鈺生物科技有限公司
聯系電話:400-820-2912
E-mail:marketing@countstar.cn

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