8月13日晚上七點，賽業生物云課堂開始了主題為“ACE2小鼠模型在中和抗體和疫苗研發中的應用”的第七期課程，需要課件的老師可以關注“賽業生物訂閱號”，后臺留言“007”。針對答疑環節未及時解答的問題，我們進行了收集整理，下文為劉璐博士針對答疑環節提出的問題給出的詳細解答。

Q1:想知道新型冠狀病毒的入侵機制是什么？

A1: 就目前的調研來看，新冠病毒的主要入侵方式是通過呼吸道感染，空氣傳播為主要形式，病毒通過呼吸系統進入機體，從上呼吸道逐漸入侵下呼吸道，突破黏膜屏障進入到肺部，造成肺部感染，而肺部的免疫反應不足以將病毒消滅，于是病毒通過與肺部細胞表達的ACE2受體結合，利用ACE2這個鑰匙打開了細胞之門，闖入了有營養的環境進行自身的瘋狂復制，細胞破裂，病毒釋放出細胞再尋找下一個目標，使得機體最開始表現為肺部器官的病理變化，而一旦病毒占據了優勢之后，免疫系統就會啟動最大限度保護機制用以免除病毒的進一步攻擊，這個想法雖美好，但也存在相當大的風險，此時炎性分子開始分泌紊亂，炎癥因子表達失調，于是引發炎癥因子風暴，進而造成其它器官組織的衰竭，最終對機體造成毀滅性的傷害。而也有文獻表明，病毒除了通過呼吸道入侵之外，還可以通過胃腸道感染的方式進入機體。病毒入侵之后的免疫機制與呼吸道感染相似，最終目的是讓自身得以存活。

Q2: 想了解腫瘤免疫中的抗體依賴感染增強的知識以及相關小鼠的信息？

A2: 一般抗體依賴感染增強是與疫苗的使用相關，也就是說抗原屬于病毒或者類似物，那么對于腫瘤免疫來說，用抗體依賴感染增強的說法似乎不太合適，我們指導腫瘤免疫治療是通過主動或被動方式使機體產生腫瘤特異性免疫應答，使腫瘤生長被抑制或者被殺傷，從而起到治療的作用。而腫瘤免疫逃逸是腫瘤細胞通過多種機制逃避機體免疫系統的識別和攻擊，從而得以在體內生存和增殖的現象。結合這幾個概念，那么抗體依賴感染增強似乎與腫瘤免疫逃逸相關，從這個角度來講，可以這樣理解，腫瘤抗原在與抗體藥物形成復合物之后，免疫系統不會直接將其清除，而是將復合物呈遞到相應的細胞中，增強抗原的存活和增殖能力。

在腫瘤免疫的研究中，小鼠模型的地位也是相當重要的，隨著基因工程技術的發展和成熟，對小鼠進行基因編輯已經成為了研究基因功能的重要手段，而在小鼠體內過表達某些致癌基因或者敲除某些抑癌基因可以導致小鼠易發腫瘤，從而制備腫瘤模型。同時，將人的腫瘤移植到小鼠體內建立人源化腫瘤模型，為了最大限度的消除免疫排斥反應，需要用到免疫缺陷小鼠。這些小鼠模型對于腫瘤免疫的研究都是相當有用的。比如我們構建的一些特異性免疫檢查點小鼠模型，就可以進行腫瘤免疫相關的一些研究。

Q3: ADE去除是哪些突變位點？中和抗體人體內半衰期多長？

A3: 許多病毒在感染過程中都可能存在ADE作用，目前最常見引發ADE現象發生的原因是由抗體Fc結構受體介導的。IgG Fc受體是免疫應答中重要的膜性調節分子，根據胞內區域特征可以分為激活型受體和抑制性受體，任何哺乳動物的IgG Fc 受體又有三類，分別是FcγR I、FcγR II、FcγR III，即我們通常所說的CD64、CD32和CD16。而FcγR II的親和力相對來說比較低，不能結合IgG單體，只能結合IgG復合物或者多聚IgG，針對于不同的Fc糖基化修飾，其對受體的親和力也不相同，因此，在研究中需要根據不同的研究目的進行分析。

不同抗原產生的抗體半衰期是不一樣的，但是可以通過一定的手段延長抗體在體內的半衰期來提高抗病毒效應，例如抗體藥物分子量大小、高等電點、糖基化修飾、FcRn結合等等因素均可影響到抗體的半衰期，因此沒有一個固定的說法。

Q4: 人源化ACE2的B6和BALB/C的區別？

A4: 其實對于人源化ACE2來說，用哪種小鼠都可以，但是如果考慮到不同的實驗目的，那么用哪種品系的小鼠還是需要進行選擇的，我們知道B6小鼠最大的特點是品系穩定并且易于繁殖，而且B6這個品系的小鼠是第一個完成基因組測序的小鼠品系。總的說來，如果用于生理病理學研究，用C57B6小鼠更合適些。BALB/c小鼠相對來說就溫順很多，當然也有易于繁殖的優點，同時雌雄體重差異較小，對于致癌物極其敏感，建立癌癥模型比較多，因此BALB/c小鼠多用于癌癥治療和免疫學研究中�？偟膩碚f，真要在哪種品系的小鼠中選擇一種的話，就根據自身的實驗目的進行參考。針對新冠病毒的研究，我們建立了多種人源化ACE2小鼠模型，其目的也是為了滿足不同的科研需求，但就目前來看，似乎BALB/c背景的ACE2小鼠對病毒的感染表現出更強的敏感性。

Q5: 劉老師，這些藥效圖是用什么設備跑出來的，是細胞儀嗎，什么名稱？

A5: 這篇文章是參考謝曉亮實驗團隊Potent Neutralizing Antibodies against SARS-CoV-2 Identified by High-Throughput Single-Cell Sequencing of Convalescent Patients’ B Cells這篇文獻，發表于cell上，這圖片展示的是噬菌斑減少中和試驗(Plaque reduction neutralization test PRNT)結果，用于檢測中和抗體的中和效價。不是直接用設備出圖，而是先做實驗處理，然后利用GraphPad Prism 8.0（GraphPad Software Inc.）軟件進行參數邏輯回歸分析來確定IC50值做出曲線圖。以上可以參考該文獻附屬材料中提到的具體實驗操作方法。
 

溫馨提示

賽業生物云課堂針對冠狀病毒、人源化小鼠、細胞培養、神經科學等主題開展了一系列課程，錯過直播的老師可以通過以下方式進行回看：

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