對GMP車間潔凈區(qū)定期進行滅菌是保證生產(chǎn)產(chǎn)品質(zhì)量的一個重要環(huán)節(jié)。目前在我國對空間進行滅菌的常用方法是比較傳統(tǒng)的甲醛熏蒸法。甲醛的殺菌能力不容置疑，但是隨著科學技術(shù)的發(fā)展以及人們環(huán)保意識的增強，其越來越受到專家的質(zhì)疑，因為甲醛是一種三致危害物。為了解決甲醛滅菌時間過長以及毒性和殘留問題（會產(chǎn)生結(jié)晶狀殘留物），國內(nèi)有不少企業(yè)開始采用汽化過氧化氫滅菌技術(shù)。過氧化氫是一種廣譜殺菌劑，汽化過氧化氫滅菌技術(shù)由于滅菌時間短、無毒、無殘留，且滅菌效果容易驗證，廣泛被歐盟國家認可。我國的GMP認證要與歐盟接軌，潔凈區(qū)采用過氧化氫滅菌技術(shù)必然為大勢所趨。

目前汽化過氧化氫滅菌已成為各國藥典、藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范(GMP)、消毒滅菌技術(shù)規(guī)范所推薦的方法，滅菌工藝已經(jīng)非常成熟，重復性好，有專門的化學指示劑和生物指示劑驗證過氧化氫氣體分布均勻情況和無菌保證水平。可廣泛應(yīng)用于生物制藥、醫(yī)療衛(wèi)生、生物實驗室和動物研究實驗室等諸多領(lǐng)域。

一、試劑與儀器：
（1）生物指示劑（BiologicalIndicator，BI）：10⁶CFU/片的嗜熱脂肪芽孢桿菌，ATCC12980；
（2）化學指示劑（ChemicalIndicator，CI）；
（3）濃度為35%的食品級過氧化氫溶液；
（4）胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基（TSB）；
（5）PEA MLT-17zeta汽化過氧化氫發(fā)生器；
（6）PEA LiRo氣體分布系統(tǒng)；
（7）滅菌車間：某疫苗生產(chǎn)單位GMP潔凈車間，潔凈區(qū)層高2.8m、面積100㎡，空間總體積約280m³。

圖1、某疫苗生產(chǎn)單位GMP潔凈車間

二、滅菌過程：
整個滅菌過程分為以下幾個階段：
（1）將PEA MLT-17 zeta發(fā)生器和LiRo氣體分布系統(tǒng)推入潔凈區(qū)前，先將設(shè)備表面用75％酒精擦拭清除干凈，根據(jù)滅菌空間體積大小，向儲液桶內(nèi)添加足量的過氧化氫溶液；
（2）通過潔凈車間的空調(diào)系統(tǒng)對潔凈區(qū)的溫度和濕度進行調(diào)控，使二者達到設(shè)備可以滅菌運行的區(qū)間范圍；
（3）在潔凈車間內(nèi)布置足量的生物指示劑和化學指示劑，并做好標記；
（4）在設(shè)備端設(shè)置滅菌程序，一個完整的滅菌循環(huán)主要包含以下4個部分：調(diào)試階段（Waiting，Conditioning，Heating），主要是為人員撤離以及設(shè)備預熱階段；快速注入階段（Vapourizing1），在此階段過氧化氫氣體以一個較快的速率注入待滅菌空間，環(huán)境中過氧化氫氣體濃度迅速升高；慢速注入階段（Vapourizing2），在此階段過氧化氫氣體以一個較慢速率注入待滅菌空間，維持過氧化氫氣體濃度保持一定的時間；降解階段（Neutralisation，Afterrun，End），在此階段過氧化氫氣體迅速分解產(chǎn)生水分和氧氣，環(huán)境中過氧化氫氣體濃度迅速下降。

圖2、滅菌循環(huán)主要滅菌程序設(shè)置

（5）當溫、濕度達到指定范圍后，關(guān)閉空調(diào)系統(tǒng)，人員撤出滅菌潔凈車間，啟動滅菌循環(huán)，對車間進行門密封；
（6）滅菌循環(huán)結(jié)束，開啟空調(diào)通風系統(tǒng)通過潔凈空氣置換以排除房間內(nèi)部殘留的過氧化氫，從而使房間內(nèi)空氣中過氧化氫氣體濃度低于職業(yè)允許暴露水平1ppm；
（7）收取化學指示劑和生物指示劑，觀察統(tǒng)計化學指示劑的變色情況，無菌操作取出生物指示劑將其接種到TSB培養(yǎng)基中，所有培養(yǎng)基均需在培養(yǎng)箱中55℃～60℃的條件下進行培養(yǎng)，觀察培養(yǎng)24h后和第7天的結(jié)果，同時做好陽性對照和空白對照；
（8）經(jīng)過24 h的培養(yǎng)，若培養(yǎng)液變渾濁，則判定為陽性；若培養(yǎng)液澄清，則為陰性；繼續(xù)培養(yǎng)至第七天，如果培養(yǎng)液變渾濁，則判定為滅菌不合格；如果培養(yǎng)液澄清，則判定為滅菌合格。

三、滅菌結(jié)果：
汽化過氧化氫滅菌技術(shù)，可對空氣與物體表面進行生物除染，是一種非常有效的消毒滅菌方法。PEA的汽化過氧化氫滅菌技術(shù)整個過程采用全自動化智能控制，可精確控制過氧化氫氣體濃度，材料兼容性好，可減少對工作人員與環(huán)境的危害，其滅菌過程、工藝具有重現(xiàn)性，綠色、環(huán)保、安全可靠。

圖3、PEA發(fā)生器和氣體分布系統(tǒng)在車間內(nèi)的擺放位置及BI和CI的布點位置

滅菌循環(huán)結(jié)束，所有的化學指示劑均變色明顯，表明過氧化氫氣體在空間內(nèi)分布均勻；所有的生物指示劑無論是在培養(yǎng)的第24h或者培養(yǎng)結(jié)束的第7天，培養(yǎng)基均未變渾濁，表明滅菌合格。

汽化過氧化氫滅菌技術(shù)是目前用于可密閉空間（如GMP車間、醫(yī)院病房、實驗動物中心、小型倉庫等）和各種人造設(shè)備（如隔離器、冷凍干燥機、孵化箱、傳遞窗、生物安全柜、壓力蒸汽滅菌器、過濾器和各類風管及管道等）的一種可靠的消毒滅菌方法，具有廣闊的發(fā)展前景，是取代甲醛和臭氧等傳統(tǒng)空間消毒滅菌的理想方法，也是今后空間消毒滅菌的發(fā)展趨勢。