MD應(yīng)用文章合集：讓核酸和蛋白定量檢測更準確有效
拒絕千篇一律，讓核酸和蛋白定量檢測更準確有效！
核酸及蛋白的定量是遺傳學(xué)和分子生物學(xué)中許多復(fù)雜實驗上游的基本檢測方法，如DNA測序、PCR/qPCR、克隆/轉(zhuǎn)染等。如何能夠準確和靈敏對核酸及蛋白質(zhì)進行定量檢測是許多實驗成敗與否的重要環(huán)節(jié)。各種方法被開發(fā)出來用于定量這些生物學(xué)成分，然而最常見的檢測手段仍然是紫外分光光度法。即DNA、RNA在微孔板讀板機測定其溶液在260nm波長處的光吸收值。原理是核酸的嘌呤、嘧啶堿基具有共軛雙健在260nm強烈光吸收值特點；而蛋白質(zhì)溶液則是在280nm波長處的光吸收值，原理是利用色氨酸的芳香性質(zhì)在280nm 處強烈光吸收值。與核酸定量檢測不同的是計算蛋白濃度會受到多種多樣的的氨基酸序列中的色氨酸殘基的影響。
當(dāng)然通常情況下也會在其他波長處進行輔助測量，以提供樣品純度的信息和檢測其他污染物。如進行核酸檢測時其260nm/280nm光吸收值作為樣品純度重要考慮因素，比值在1.8-2.0之間說明雜蛋白等物質(zhì)含量較低。
但傳統(tǒng)光吸收檢測法，不足之處其最低檢測線最低僅250 ng/mL，低于這個濃度的DNA溶液使用微孔板讀板機的熒光法可進行更準確定量檢測，如熒光法對dsDNA檢測下限可達到0.5pg/ul，而蛋白檢測下限可達10ng/ml，這里介紹Molecular Device公司各種微孔板讀板機可為核酸及蛋白質(zhì)檢測提供了多種可靠方案。結(jié)合SoftMax Pro 軟件強大的數(shù)據(jù)處理分析功能，可一鍵生成定量結(jié)果，并可根據(jù)用戶需求定制格式并導(dǎo)出數(shù)據(jù)。
