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免疫組化抗原修復(fù)注意事項(xiàng)

瀏覽次數(shù):1437 發(fā)布日期:2015-5-5  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

經(jīng)甲醛固定的部分組織細(xì)胞,因固定過程中可能會形成醛鍵或羧甲基而封閉部分抗原決定簇,使免疫組化標(biāo)記敏感性明顯降低,因此在染色前,有些抗原需進(jìn)行修復(fù)或暴露。

抗原修復(fù)方法可分為化學(xué)方法和物理方法。化學(xué)方法是以酶消化方法,常用胰蛋白酶及胃蛋白酶,配制濃度與消化時間要適度。常用的物理方法有單純加熱、微波處理和高壓加熱。在選用這三種方法時,浸泡切片的緩沖液的離子強(qiáng)度和pH、加熱的溫度和時間均影響著抗原修復(fù)效果。

1、pH的應(yīng)用范圍及選擇

抗原修復(fù)液的pH非常重要,有效的抗原修復(fù)pH要比修復(fù)液的化學(xué)成分更重要,同樣的修復(fù)液隨著pH的升高染色的強(qiáng)度逐漸增強(qiáng),但最佳pH范圍為6.0-10.0。目前大家公認(rèn)的最好的抗原修復(fù)液是pH6.0的檸檬酸鹽緩沖液和pH8.0的EDTA緩沖液。作為通用修復(fù)液堿性pH的修復(fù)液要比酸性的有效,而對固定很長時間舊的存檔組織,酸性pH的修復(fù)液則優(yōu)于堿性的修復(fù)液。

2、抗原修復(fù)時應(yīng)選擇最佳溫度

70-90℃的溫度對未經(jīng)固定的蛋白質(zhì)可發(fā)生變性,但經(jīng)福爾馬林固定的蛋白質(zhì),溫度必須達(dá)到92℃以上方能使其變性。研究結(jié)果顯示,溫度為92-98℃是合適的,95℃效果最好。

3、抗原修復(fù)液必須遵循自然降溫規(guī)律,否則效果不好或達(dá)不到抗原修復(fù)的目的

抗原修復(fù)持續(xù)時間過后,取出放于室溫中讓其慢慢地降溫,絕對不能為了爭取時間,強(qiáng)行用冰塊或冷水使其降溫。這是因?yàn)楫?dāng)高溫中的抗原蛋白分子鏈脫離了其他的束縛或聯(lián)結(jié),要有一個自然環(huán)境讓其自然放松下來,隨著溫度的降低,它們會慢慢地恢復(fù)原來的形態(tài)和構(gòu)型。

4、盡量使用足量的抗原修復(fù)液

應(yīng)用于抗原修復(fù)的液體,一定要充足,防止切片干涸。應(yīng)用大量的抗原修復(fù)液時,由于它的量較大,可延緩液體的沸騰時間,增加切片受微波輻射的量,對抗原修復(fù)將達(dá)到徹底。

抗原修復(fù)必備品:

廠商

目錄號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

目錄價

eBioscience

00-4956

IHC Antigen Retrieval Solution – High pH (10X)

500ml

1836

eBioscience

00-4955

IHC Antigen Retrieval Solution – Low pH (10X)

500ml

1836

閱讀原文:http://www.liankebio.com/TechServiceShow/articleID/2015050005.html

發(fā)布者:杭州聯(lián)科生物技術(shù)股份有限公司
聯(lián)系電話:4006721600
E-mail:network@liankebio.com

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