Western樣品制備方法簡介
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| 1、細胞抗原的處理方法 向收集到的細胞中加入RIPA裂解緩沖液（蛋白酶抑制劑在使用前加入，終濃度為2ug/ml）在冰上裂解30-60min，然后再插入冰盒進行超聲，超聲強度以不產生泡沫為宜，超聲每次2-3s，重復3或4次，12000g離心3-5min，吸取上清備用。 2、 組織抗原的處理方法 將組織從動物體內取出（樣品不宜反復凍融），取少量（1-2g）放入玻璃勻漿器中研磨成勻漿，然后轉入微量離心管中進行超聲，超聲強度以不產生泡沫為準，超聲每次5-7s，重復5或6次，再12000r/min，離心3-5min，吸取上清備用。 上述兩種方法得來的樣品處理液還要加入1/4體積左右的電泳上樣緩沖液，然后放在沸水浴中加熱3-4min使蛋白質變性，方可作為樣品準備行凝膠電泳。 | ||||||||||||||||||||
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細菌抗原、分泌上清樣品、經抽提純化的蛋白質樣品可以直接加入電泳上樣緩沖液，然后在沸水浴中加熱3-4min使蛋白質變性。 | ||||||||||||||||||||
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