羅氏FFPE 組織切片核酸純化試劑盒操作說明
瀏覽次數(shù)：7161 發(fā)布日期：2015-4-6
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High Pure FFPET DNA Isolation Kit基于離心柱法的抽提原理，免去DNA沉淀和有機(jī)試劑抽提的步驟，是快速核酸抽提的理想工具。
整個抽提過程僅需3小時（含脫蠟過程）；
獲得高DNA得率和質(zhì)量；
在qPCR，芯片分析和測序等下游應(yīng)用中獲得強(qiáng)大信號。 |
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圖1：從FFPET樣本中獲得高得率的DNA
柱形圖顯示了從3種不同乳腺癌或結(jié)腸癌異種移植組織的5um FFPET組織切片樣品中獲得的DNA平均得率。通常來說，在不同組織切片的樣品個體間存在一定的DNA得率變異。
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圖2：從樣品中抽提獲得高質(zhì)量DNA，適用于多種下游應(yīng)用。
在HT29異種移植FFPET樣本中抽提獲得DNA，再進(jìn)行100,200,300,400bp片段長度擴(kuò)增子的多重PCR。
泳道1和2：使用二甲苯進(jìn)行脫蠟
泳道3和4：使用十六烷進(jìn)行脫蠟
泳道5和6：多重PCR質(zhì)控對照，核酸樣品為人全血中抽提的完整基因組DNA
圖2：從近期和長期保存的FFPET樣品中均可抽提獲得高RNA得率 | |
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結(jié)果：所有泳道中均出現(xiàn)4個清晰的目標(biāo)條帶，表明High Pure FFPET DNA Isolation Kit能在FFPET樣本中抽提獲得高質(zhì)量DNA，適用于CGH芯片分析，二代測序等對核酸模板質(zhì)量要求高的下游應(yīng)用。 |
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圖3：從樣品中抽提獲得高質(zhì)量DNA，提高qPCR檢測靈敏度
作為qPCR實(shí)驗(yàn)中的核酸模板，要求高質(zhì)量DNA，即良好的核酸得率、純度和片段大小分布，并能高靈敏度和不偏倚地檢測到目標(biāo)基因。取5ul DNA洗脫液，分別通過LightCycler 480 Real-Time PCR Instrument擴(kuò)增檢測CycA（442bp）或myo（89bp）基因片段。
結(jié)果：High Pure FFPET DNA Isolation Kit抽提獲得的DNA樣品能在qPCR研究中獲得更高的檢測靈敏度（提前出線的Cq值）。
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圖4：將DNA應(yīng)用于甲基化敏感性高分辨率熔解曲線分析（MS-HRM）等前沿應(yīng)用
將不同腫瘤研究樣本的DNA抽提物經(jīng)重亞硫酸鹽處理，通過LightCycler 480 Instrument進(jìn)行APC基因的MS-HRM分析，不同腫瘤組織的APC基因具有不同程度的甲基化。
結(jié)果：使用High Pure FFPET DNA Isolation Kit抽提獲得的DNA是MS-HRM分析的理想模板。在該研究中，共發(fā)現(xiàn)3中不同程度的甲基化范圍：樣本A的APC甲基化水平在10-100%，樣本B的甲基化水平在0-1%，樣本C的APC不存在甲基化。 | |
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產(chǎn)品信息 |
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產(chǎn)品 |
目錄號 |
包裝規(guī)格 |
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High Pure FFPET DNA Isolation Kit |
06 650 767 001 |
50次抽提反應(yīng)。 | |
閱讀原文：http://www.liankebio.com/ProductCenterShow/articleID/2015040006.html
