顯色法中，在405nm波長(zhǎng)處的60吸附讀數(shù)（見(jiàn)下圖）根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣品中內(nèi)毒素含量的不同生成了不同斜率的曲線。達(dá)到吸收率所需要的時(shí)間通過(guò)特殊的計(jì)算機(jī)程序進(jìn)行計(jì)算，并將之用為推斷具有未知內(nèi)毒素含量的樣品的依據(jù)（具體的值詳見(jiàn)表1-顯色測(cè)試）。由于具有最低濃度（0.005-0.001 EU/ml）的標(biāo)準(zhǔn)樣品和Arium水未達(dá)到所需的計(jì)算內(nèi)毒素含量的消光值，因此它們被認(rèn)定為低于檢測(cè)限值。

Arium pro VF超純水所獲得的值明顯比0.001 EU/ml曲線的繪制點(diǎn)更加低。下圖顯示了與兩個(gè)選定的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)（0.05 EU/ml and 0.005 EU/ml）相比，在自來(lái)水、去離子水（DI水）和Arium水中所測(cè)得的內(nèi)毒素濃度的數(shù)據(jù)集合。在水樣品中的內(nèi)毒素含量通過(guò)使用內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)所測(cè)得的值來(lái)計(jì)算，詳見(jiàn)表2.

在DI水樣品中，檢測(cè)到內(nèi)毒素為0.02 EU/ml，這個(gè)值低于WFI（注射用水）現(xiàn)行的有效值。在自來(lái)水中，出乎意料地檢測(cè)到高達(dá)25 EU/ml的內(nèi)毒素載量。該結(jié)果未作進(jìn)一步分析。與之相對(duì)，在系統(tǒng)所產(chǎn)生的超純水中所檢測(cè)到意料之外的低值，< 0.001 EU/ml，這個(gè)值遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于常見(jiàn)的限值。

在DI水樣品中，檢測(cè)到內(nèi)毒素為0.02 EU/ml，這個(gè)值低于WFI（注射用水）現(xiàn)行的有效值。在自來(lái)水中，出乎意料地檢測(cè)到高達(dá)25 EU/ml的內(nèi)毒素載量。該結(jié)果未作進(jìn)一步分析。與之相對(duì)，在系統(tǒng)所產(chǎn)生的超純水中所檢測(cè)到意料之外的低值，< 0.001 EU/ml，這個(gè)值遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于常見(jiàn)的限值。 

結(jié)論

測(cè)試結(jié)果顯示了Arium pro VF系統(tǒng)生產(chǎn)的超純水可作為一種方便、實(shí)惠的選擇，用于內(nèi)毒素測(cè)試的樣品制備，因?yàn)樵谄渌�生產(chǎn)的超純水中檢測(cè)到的內(nèi)毒素濃度非常低（<0.001 EU/ml）。得到的結(jié)果也證實(shí)了早期關(guān)于在Arium超純水中發(fā)現(xiàn)內(nèi)毒素載量<0.001 EU/ml的試驗(yàn)。

在此超純水中的內(nèi)毒素濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于美國(guó)藥典所規(guī)定的限值，這也使得該超純水理論上適用于制藥產(chǎn)品的生產(chǎn)/內(nèi)毒素監(jiān)測(cè)方面。相關(guān)的例子包括產(chǎn)品制劑，透析過(guò)濾解決方案，層析緩沖液以及用于萃取、清洗、無(wú)菌步驟和細(xì)胞培養(yǎng)方案的水等。

在細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用范圍內(nèi)，我們需要在工藝的各個(gè)步驟都對(duì)污染物保持高度警惕。為了對(duì)內(nèi)毒素對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)物及細(xì)胞敏感度的影響保持可控，尤其是與此類內(nèi)毒素相關(guān)時(shí)，用于細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基都必須要明確不含可檢測(cè)到的內(nèi)毒素含量（見(jiàn)參考文獻(xiàn)5）。

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參考文獻(xiàn)/更多信息

1 Steck, S. : Endotoxine und ihre Bedeutung bei R & D Applikationen. Bioforum 6/2006.
2 Endosafe® -PTS™ Glucan Assay, Charles River Laboratories International, Inc, 2009.
3 Endotoxin Compendium, V 2.11, Hyglos GmbH, Bernried, Germany.
4 Untersuchungsbericht Fresenius Medical Care, Deutschland GmbH, Werk St. Wendel, 2007.
5 Dawson, M.E. : LAL Update von Associates of Cape CodIncorporated, March 1998, Vol. 16, No. 1. Adapted from the original German article by Dr. Herbig, June 7, 2012

致謝

我們要特別鳴謝德國(guó)Laupheim的Stephanie Steck of Rentschler Biotech¬nologie的Stephanie Steck博士，感謝他百忙之中抽空審查此篇文章并就相關(guān)主題開(kāi)展了建設(shè)性的討論。