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合相色譜法鑒別香草提取物

瀏覽次數:2218 發布日期:2013-12-4  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
Paula Hong, Michael Jones, and Patricia McConville
 
目的
相比于反相色譜法,本方法最大程度上簡化了樣品制備、降低了溶劑使用量并實現正交分離,是快速且靈敏的香草提取物篩選和鑒定分析方法。
 
背景
為降低香草提取的成本,一些制造商使用合成或人工香料替代更為昂貴的純香草。在許多情況下,這些便宜的替代品包括合成成分,例如乙基香草醛。但某些提取物含有潛在危害性摻雜物,其中包括香豆素,即零陵香豆散發出的香味。這種特殊的摻雜物是一種可疑致癌物,可以與血液稀釋藥物發生反應。在美國,香豆素已被禁止用做食品成分,美國食品藥品監督管理局(2009)針對近年來其在香草提取物中的濫用發出了消費者警告1
 
現在已開發出大量的反相液相色譜(RPLC)方法用于分析,以確定香草提取物中的真實成分2-4。這些方法能夠篩選出合成和人工香料,以及香草醛的次生成分,后者是香草豆莢正宗提取物的標志物。這些方法可實現高通量分析4,正交分離可依據不同的選擇性帶來便利。
 
UPC技術針對香草醛的強極性、次生成分的保留性更強,從而能夠對潛在危害性非極性摻雜物進行充分的保留和鑒定。
 
例如在反相分離中,某些香草醛次生化合物(例如香草酸)的保留性很差,使得這些極性成分的分離很困難5。在合相色譜法中,各組分的洗脫性能相反,從而實現了強極化化合物更長的保留時間以及更好的分離度。
 
解決方案
使用含有來自香草豆莢(香草醛,對羥基苯甲酸,對羥基苯甲醛和香草酸)的香味成分,以及合成香草醛(乙基香草醛)和禁用摻雜物香豆素的標準溶液進行方法開發。標準溶液由異丙醇制備。實驗采用ACQUITY UPC2™ BEH 2- EP 130Å 3.0 x 100 mm,1.7 μm色譜柱開發出一個2.5 min的方法,如圖1所示。UV方法條件中使用了20 mM檸檬酸的甲醇溶液作為改性劑/添加劑,用以改善酸性成分的峰形。

實驗針對UV方法的重復性(表1)和線性(表2)進行了評估。配制0.250-500 μg/mL的標準溶液。在12.5 ­g/mL濃度下,保留時間的重復性(n=5)≤0.10 %RSD,相同標準溶液進樣的峰面積重復性為< 1.80 %RSD。線性范圍涵蓋兩至三個數量級,與分析物相關,R2 > 0.999(表2)。被測分析物的定量限(LOQ)的范圍在0.250至1.25 μg/mL之間。如果在分析香草提取物時需要稀釋樣品,使用UV法可滿足此特定分析的靈敏度要求。

為檢測摻雜物,將此方法用于篩選來自不同地理區域的香草提取物(包括標記為“純品”和“仿制品”的樣品)(圖3)。使用乙醇對香草提取物進行十倍稀釋(樣品混溶),并在分析前過濾。來自美國的香草提取物仿制品(A)的分析結果顯示:同時存在有合成香草醛(乙基香草醛)和香草醛。由于此樣品中不存在其他的天然香料成分,說明香草醛極有可能是合成的。在美國之外購得的已知香草提取物的偽造品(B)含有摻雜的香豆素以及香草醛,由于不含次生香草成分,因此也很可能來源于合成。最后,標記為“純品”的香草提取物(C)的分析結果確認其為真品。此樣品中同時鑒定出了香草醛和次生天然香料成分,并進行了定量分析。此外,香草醛和對羥基苯甲醛的比值為14.9,位于純正香草提取物之前的指示范圍內(表3)2。 
 

總結
Waters® ACQUITY UPC2系統采用CO2流動相配合有機共溶劑和添加劑,可為RPLC提供正交選擇性。對于香草提取物的分析,此項分離技術使香草醛的強極性、次生成分的保留性更強,并對非極性摻雜物進行充分的保留和鑒定。此外,相比于傳統的RPLC法,此項色譜技術可提高效率、降低溶劑用量,同時是一種適用于分析香草提取物的高通量、靈敏的篩選方法。
 
參考文獻
1.  FDA. Some “Vanilla Extract” Produced in Mexico is No Bargain. Consumer Update. U.S. Food and Drug Administration Website; 2009.
2.  Jenkins T, Waite M. Screening of Commercial Vanilla Extracts for Authenticity Using the Breeze 2 Modular HPLC System. Waters Application Note 720002877en. 2008 December. 
3.  Cicchetti E, Chaintreau A. Quantitation of the main constituents of vanilla by reverse phase HPLC and ultra-high-pressure-liquid-chromatography with UV detection: Method validation and performance comparison. Journal of Separation Science. 2009; 32(17):3043-3052.
4.  Sharma UK, Sharma N, Sinha AK, Kumar N, Gupta AP. Ultrafast UPLC-ESI-MS and HPLC with monolithic column for determination of principal flavor compounds in vanilla pods. J Sep Sci. 2009; 32(20):3425-3431.
5.  Lavine BK, Corona DT, Perera UDNT. Analysis of vanilla extract by reversed phase liquid chromatography using water rich mobile phases. Microchemical Journal. 2012; 103(0):49-61.
 
發布者:沃特世科技(上海)有限公司
聯系電話:800(400)8202676 (免費電話支持專線)
E-mail:Jackie_qian@waters.com

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