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[摘要]目的:用氯化鋰—匹魯卡品制備Wistar 大鼠癲癇模型,探討匹魯卡品合適的用量及用法。方法: Wistar 大鼠腹腔注射氯化鋰3mmol /kg , 24h 后,給予不同劑量的匹魯卡品腹腔注射。結果:40mg/ kg 組和30mg/ kg 一次注入組的持續性癲癇大發作(SE) 出現率和亡率均為100% , 慢性復發性癲癇(SRS) 模型成功率為0%; 30mg/kg 分3 次注入組SE 出現率為28% ,死亡率為10% ,SRS 成功率為18%;25 mg / kg 3 次注入組SE 出現率為10% ,死亡率為0% ,SRS 成功率為10%。結論: 用氯化鋰—匹魯卡品制備Wistar 大鼠癲癇模型,魯卡品的用量應為25～30mg/ kg ,分次注入法優于單次注入法。
癲癇為一常見病,由于其發作沒有預見性,發作的程度也不能人為控制,從而給研究帶來困難,因此建立實驗性動物癲癇模型, 對于探索癲癇的發生機制,篩選、評價抗癲癇藥物的作用,具有重要意義。
動物癲癇模型的制備有很多種方法, 文獻報道氯化鋰—匹魯卡品注射所致的大鼠癲癇持續狀態(SE) , 時間達到1 h 并且存活者, 即為自發作性癲癇(SRS) 模型[1 ,2 ] ,這種癲癇模型類似于成年人癲癇中最常見的類型, 即顳葉癲癇, 并且具有操作簡單、重復性好、受外界干擾小等優點。本實驗用氯化鋰—匹魯卡品制備Wistar 大鼠癲癇模型,探討匹魯卡品的具體劑量及用法。
1 材料與方法
1. 1 實驗動物與分組 健康雌性Wistar 大鼠,體重210～260g , 購于中國醫學科學院實驗動物繁育中心,在室溫、自然光環境下給予充足的食物及水。按匹魯卡品注射劑量分為40mg / kg 一次注入組( 6只) 、40mg/ kg 分3 次注入組(4 只) 、30mg/ kg 一次注入組(5 只) 、30mg/ kg 分3 次注入組(50 只) 、25mg/ kg 分3 次注入組(10 只) 。
1. 2 癲癇模型的制備 所有大鼠均于實驗前24h時腹腔注射氯化鋰3mmol / kg , (濃度為1. 5mol / L ) [3 ]。24h 后, 給予不同劑量的匹魯卡品腹腔注射(濃度為0. 1%) 。分次注入組每次注射時間相隔10min [4 ]。凡出現持續性癲癇發作(SE) , 并持續至1h 者, 給予安定10 mg/ kg 腹腔注射予以終止[2 ]。
2 結果
2. 1 各劑量組不同表現統計 所有大鼠均于第一次注射匹魯卡品后5～10min 出現膽堿能周圍神經刺激癥狀, 即豎毛、流涎、血淚癥, 并出現不同程度的以下表現, 包括: 少動、盯視、嘴部自動癥、點頭、眨眼、濕狗樣晃動; 33 只大鼠出現瞬時性癲癇大發作: 表現為直立、前肢和頭部陣攣、摔倒, 瞬時性癲癇大發作開始于第一次注射30min 之后,每次持續30～45s , 之后每隔2～5min 再次發作; 30 只大鼠出現持續性癲癇大發作(1h) , 表現與瞬時性癲癇大發作相同; 20只大鼠在持續性癲癇大發作后1～2天死亡; 10只SE 發作后存活者, 均于20～60 天出現自發性癲癇發作, 表現為耳抖、咀嚼、盯視等動作,每次持續數秒至數十秒,見表1。
2. 2 癲癇模型成功組的比較 見表2
25mg/ kg3次注入組與30mg / kg 3 次注入組SRS 成功率統計學分析(統計學方法為χ2 檢驗,χ2 = 0. 38) : P > 0. 05 , 即上述兩種方法無統計學差異。
上述結果顯示, 用氯化鋰—匹魯卡品制備Wistar 大鼠癲癇模型, 匹魯卡品的總量應為25～30mg/ kg , 劑量為40mg/ kg 均可出現SE , 但死亡率極高;總量在30mg / kg 時,一次注入時死亡率較高, 應當分次注入, 可根據鼠的不同表現酌情增減,以適應不同的個體差異。
3 討論
用氯化鋰—匹魯卡品腹腔注射制備的Wistar大鼠癲癇模型具備Racine 所述5 級行為表現[5 ] ,即: I 嘴和面部抽動; I I 頭部陣攣性運動; I I I 前肢陣攣; IV 陣攣性直立; V 姿勢控制喪失(摔倒) 。其中I～ I I I 級行為代表復雜部分性發作, IV～ V 級行為代表了繼發全身性發作。此模型較好地模擬了人類癲癇發生、擴布和形成的全過程,是唯一與臨床最常見的成年人癲癇病, 即顳葉癲癇的特征相一致的動物模型[6 ] : 并且有操作容易、重復性好的優點, 是癲癇發生、形成機理研究較理想的模型。
用氯化鋰—匹魯卡品制備Wistar 大鼠癲癇模型, 文獻報道匹魯卡品單次注入30mg/ kg , 可使70%大鼠發作SE , 但盡管SE 持續90min 時用安定終止,仍有45%死亡;匹魯卡品30mg/ kg 分次注射,發作SE 后死亡率降至10 %以下,并且低劑量重復注射后, SRS 的幾率大于大劑量單次注射的幾率[7 ] ,因此,小劑量分次注射的方法優于大劑量單次注射。本實驗的結果與文獻報道一致。
與文獻報道相比較, 本實驗的癲癇模型成功率低,而死亡率高,其可能原因為:本實驗均為雌性鼠,而文獻多為雄性鼠[1 , 2 , 6 ] , 不同性別鼠對匹魯卡品的易感性不同; 文獻報道膽堿能神經元在大鼠出生后2 周開始發揮作用,4 周時乙酰轉移酶達成年大鼠的83% ,因此,大鼠對匹魯卡品產生癲癇的敏感性具有年齡依賴性[8 ] ,鼠齡為3 周時死亡率最高,成年大鼠的死亡率又有所下降,本實驗所采用者為成年鼠,但較文獻報道者略小(以上實驗鼠體重為210～260g ,文獻多為250～300g) ,可能是原因之一; 阿托品可拮抗匹魯卡品致癇及對腦組織的損害作用, 本實驗未予阿托品,也是原因之一。
參考文獻:
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