丁娟娟 紀英華 趙嘉胤 莊淑萁
沃特世科技（上海）有限公司

 

摘要：2008年，三鹿奶粉被爆檢出對人體有害的三聚氰胺，一時間震驚全國。自此，國家一直在加強對奶粉中三聚氰胺的監管。2013年初，新西蘭牛奶及奶制品被檢測出含有低含量的有毒物質雙氰胺，新西蘭政府已經下令禁售含有雙氰氨的奶類產品。

沃特世（Waters^®）公司一直致力于保障人類的健康生活，第一時間開發了奶粉中雙氰胺和三聚氰胺同時檢測的方法，以提高檢測分析的有效性。

二氰二氨（雙氰胺），縮寫DICY或DCD。是氰胺的二聚體，也是胍的氰基衍生物。化學式C₂H₄N₄。白色結晶粉末。可溶于水、醇、乙二醇和二甲基甲酰胺，幾乎不溶于醚和苯。

三聚氰胺，俗稱密胺、蛋白精，是一種三嗪類含氮雜環有機化合物，被用作化工原料。微溶于水，可溶于甲醇、甲醛、乙酸、熱乙二醇、甘油、吡啶等，不溶于丙酮、醚類，對身體有害，不可用于食品加工或食品添加物。

分析難點：
對于同時分析奶粉中雙氰胺和三聚氰胺，其主要難點在于雖然兩者均為極性物質，都需要使用HILIC色譜分離模式，但根據之前的經驗，三聚氰胺在BEH HILIC色譜柱上保留和峰形較好，而雙氰胺在BEH Amide色譜柱上保留和峰形較佳。因此需要建立一個統一的LCMSMS方法用于分析雙氰胺和三聚氰胺，并獲得更好的峰形和靈敏度。

另一方面，傳統的三聚氰胺方法是采用Oasis^® MCX這種反相和陽離子交換的復合SPE模式，然而這種方法完全不適用于雙氰胺；而Sep-Pak^® AC2小柱雖然可以用于雙氰胺的凈化和富集，但仍需開發一個更為快速的前處理方法。

實驗方法：
儀器：Waters ACQUITY UPLC^® with Xevo^® TQ-S
色譜柱：ACQUITY BEH Amide column，1.7μm, 2.1*150mm
流動相A： 5mM甲酸銨 0.1%甲酸水溶液
流動相B：乙腈
流速：0.4mL/min
柱溫：35℃
進樣體積：5μL
梯度曲線：

質譜參數：
毛細管電壓：2.5kv
脫溶劑氣溫度：500度
脫溶劑氣流速：8 00 L/Hr
碰撞氣流速：0.15mL/min

樣品前處理方法：

為達到快速、高效的檢測目的，本實驗采用Waters DisQuE樣品制備試劑盒。
Waters DisQuE樣品制備流程如下：

本實驗在未添加同位素內標的情況下，空白基質添加1ppb樣品濃度，測得雙氰胺平均回收率為83%，三聚氰胺平均回收率為71%。

實驗結果

結論：
本文采用沃特世超高效液相色譜UPLC^®與高靈敏度三重四極桿Xevo TQ-S，開發了同時分析奶粉中雙氰胺和三聚氰胺的檢測方法，此方法建立在HILIC機理的BEH Amide色譜柱上。對于基質中添加1ppb的待測物，經過DisQuE基質分散樣品制備盒凈化后進樣，不但峰形良好、不受基質干擾影響，靈敏度也完全滿足檢測要求。

為了達到快速、高效的分析目的，本文采用DisQuE基質分散樣品制備盒，樣品經簡單的蛋白沉淀后加入到DisQuE試劑盒中凈化，之后直接進樣即可，無需揮干復溶。方法簡單、快速，尤其對于大批量樣品的檢測，該方法可以大大提高分析效率。

在LCMSMS方法開發中，雜化顆粒的HILIC模式色譜柱起到了很大作用，首先兩種待測物均為極性化合物，反相色譜無法保留，HILIC提供了一個互補的選擇。其次在眾多HILIC模式色譜柱中，BEH Amide色譜柱為雜化顆粒技術，pH耐受范圍廣（pH 1-10），為方法開發提供了更大的空間，且BEH Amide在此應用中具有更好的選擇性和峰形。