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法測效靶細胞殺傷——用流式細胞術

瀏覽次數:2267 發布日期:2012-6-20  來源:SciMall科學在線
做免疫學特別是腫瘤學實驗,總免不了要測淋巴細胞或其他細胞對腫瘤細胞的殺傷,國外最常用的是Cr51放射實驗,但這個方法在國內的不少地方都不能做,而MTT這個方法又太老,而且也不準確,那么替代方法就用流式細胞術,又方便,又準確。
 
具體參照如下:
1、計數靶細胞,并加入CFSE,使CFSE終濃度達到2uM,37度30分鐘。
2、拿出后,1000rpm,5min,可隱約看到細胞染成黃色,PBS洗三次
3、與效應細胞混培,作用4-6小時。
4、將細胞混合液消化取出,洗二次,PI工作液5ul,避光30分鐘后上流式
5、CFSE,PI雙陽性的細胞為被殺傷的靶細胞,除以靶細胞總數,即為殺傷率。

注意事項:
1、CFSE及PI的濃度必須注意,寧低勿高,個人感覺,如果標高的話,在4度放一晚好像會好一些
2、必須設全陰,CFSE單標,PI單標,CFSE+PI雙標并同步化的靶細胞的參照.
3、作用時間不能太長,不要超過8個小時。
 
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發布者:上海睿之生物醫藥科技有限公司
聯系電話:021-64689011
E-mail:service@scimall.cn

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