DAPI染色液的使用方法及注意事項

瀏覽次數：9924　發布日期：2012-1-6　來源：本站　僅供參考，謝絕轉載，否則責任自負

DAPI染色液(DAPI Staining Solution)是經過精心優化幾乎適用于所有常見細胞和組織細胞核染色的染色液。DAPI，即2-(4-Amidinophenyl)-6-indolecarbamidine dihydrochloride，也稱DAPI dihydrochloride，分子式為C₁₆H₁₅N₅·2HCl，分子量為350.25，CAS Number 28718-90-3。DAPI是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料。和雙鏈DNA結合后可以產生比DAPI自身強20多倍的熒光。和EB(ethidium bromide)相比，對雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。DAPI染色常用于細胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。DAPI也常用于普通的細胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。DAPI的最大激發波長為340nm，最大發射波長為488nm；DAPI和雙鏈DNA結合后最大激發波長為364nm，最大發射波長為454nm。 DAPI染色液用于固定細胞或組織的細胞核染色。

保存條件： -20℃避光保存

使用說明：

1、對于細胞或組織樣品，固定后，適當洗滌去除固定劑。隨后如果需要進行免疫熒光染色，則先進行免疫熒光染色，染色完畢后再按后續步驟進行DAPI染色。如果不需要進行其它染色，則直接進行后續的DAPI染色。

2、對于貼壁細胞或組織切片，加入少量DAPI染色液，覆蓋住樣品即可。對于懸浮細胞，至少加入待染色樣品體積3倍的染色液，混勻。

3、室溫放置3-5分鐘。

4、吸除DAPI染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5分鐘。

5、直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。細胞發生凋亡時，會看到凋亡細胞的細胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染。

注意事項：

1、DAPI對人體有一定刺激性，請注意適當防護。

2、熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當天完成檢測。

3、為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。

4、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。