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原代細胞核仁的制備

瀏覽次數:2188 發布日期:2011-2-1  來源:www.pricells.com.cn

                                   原代細胞核仁的制備

試劑和器材: 
1. 懸浮緩沖液:0.34mol/L蔗糖、0.05mmol/L MgCl2、10mmol/L Tris-HCl,pH7.5;
2. 密度阻滯溶液:0.88mol/L蔗糖、0.05mmol/L MgCl2、10mmol/L Tris-HCl,pH7.5;
3. 按要求向溶液中加入蛋白酶抑制劑;
4. 吊桶式低溫低速或高速離心機;
5. 超聲發生器;
6. 光學顯微鏡(相差或普通光學顯微鏡);

實驗方法:
   所有操作須在0—4℃完成。
1. 將純化的原代細胞細胞核溶于懸浮緩沖液中;
2. 超聲處理懸液10—15s,中間間隔30—40s;
3. 用1g/L美藍染色,通過相差或普通光學顯微鏡監測核的破裂。通常原代細胞細胞核完全破裂需要40—60s的超聲處理;
4. 在離心管中,將超聲處理物加入到一半體積的密度阻滯溶液上,2000g離心20min并收集核仁沉淀;

發布者:武漢原生原代生物醫藥科技有限公司
聯系電話:027-87490190
E-mail:service@pricells.com.cn

標簽: 原代細胞
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