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提取動物組織DNA的方法

瀏覽次數:6559 發布日期:2010-12-22  來源:方統科技

【實驗步驟】
1.組織塊解凍,用生理鹽水洗去血污,剪取約0.5g組織,剪小放入2.0ml離心管中,用FM-200P研磨45秒;
2.加入0.45ml TES混勻,再加入50ul SDS(10%),5.0ul蛋白酶K(20mg/ml),充分混勻后,于56°C保溫4-6h,每2h搖1次。
3.放置到室溫,加入等體積飽和酚(500ul),顛倒混勻,10000r/m,離心10m,分離水相和有機相,小心吸取上層含核酸的水相,到一個新的1.5ml離心管。
4.加入等體積酚:氯仿:異戊醇(25:24:1),顛倒混勻,10000r/m,離心10分鐘,取上層轉移到新的1.5/2.0ml離心管中;
5.加入等體積氯仿:異戊醇(24:1),顛倒混勻,10000r/m,離心10分鐘,取上層清液到一個新的1.5/2.0ml離心管;
6.加入2.5倍體積的-20°C預冷的無水乙醇沉淀DNA,觀察現象。
7.12000 r/m,離心10分鐘,棄乙醇;
8.-20°C保存的75%乙醇洗滌,10000 r/m,離心5分鐘,去乙醇,55°C干燥DNA;
9.加入適量TE溶解DNA(具體依DNA的多少而定),-20°C保存備用;

【注意事項】
1.抽提每一步用力要柔和,防止機械剪切力對DNA的損傷。
2.取上層清液時,注意不要吸起中間的蛋白質層。
3.乙醇漂洗去乙醇時,不要蕩起DNA。
4.離心后,不要晃動離心管,拿管要穩,斜面朝外。

發布者:廣州市方統生物科技有限公司
聯系電話:020-85699575,13316159437,、,13316159435
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標簽: 動物組織 DNA
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