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SRSV (Small round structured Virus) 小圓結(jié)構(gòu)病毒的離心分離

瀏覽次數(shù):2512 發(fā)布日期:2008-12-30  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

SRSV會導(dǎo)致食物中毒,癥狀:腹瀉,嘔吐,發(fā)燒等

設(shè)備:1. 通用臺式或立式高速冷凍離心機(jī)(有15ml 角轉(zhuǎn)頭及1.5ml 微量轉(zhuǎn)頭)
          2. 超速離心機(jī):Hitachi CS150GXL微量超速離心機(jī)S52ST甩平轉(zhuǎn)頭,4×5mlPA管,或落地式超速離心機(jī)CP70MX,日立P40ST轉(zhuǎn)頭,6×13ml薄壁PA管或P65ST轉(zhuǎn)頭,4×5ml薄壁PA管,
分離步驟:
1.病毒性腸炎病人糞便或感染病毒的動物、水產(chǎn)品的組織1g-2g,加10ml 純水放入15ml PP管
2.4000xg,4℃離心30分
3.去沉淀,上清液加入HCFC141b攪拌2分鐘
4.2000xg,4℃離心30分
5.去沉淀,上清液用于超速離心。
6.1.2ml,30%(w/w) 蔗糖液置于5ml 管下部,上部用(5)上清液加至距管口3mm(約3.6ml)或其他容量離心管按比例配置梯度液和樣品
7.超速離心純化:35,000rpm-38,000rpm (RCFmax約12,470xg-147,000xg),4℃,4-3小時,加速“5”,減速“7”
8.超速離心后移去上清液及30%蔗糖液,小心地吸去沉淀上部殘液(注意不要觸及沉淀!)
9.沉淀加36ul 純水用石蠟封口,直立4℃冰箱中保存過夜。
10.次日,取出,振蕩30分鐘,移入1.5ml eppendorf 管
11.高速離心機(jī)15000rpm ,4℃,30分
12.病毒在上清液中。可取1—2ul 上清液負(fù)染后上透射電鏡觀察(100KV,×40000)SRSV為小球形,直徑約20—30nm。


標(biāo)簽: CRSV 病毒 離心 分離
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