一、目的要求

利用濾膜法測定水中大腸菌群。

二、基本原理

濾膜法是采用過濾器過濾水樣，使其中的細菌截留在濾膜上，然后將濾膜放在適當的培養基上進行培養，大腸菌群可直接在膜上生長，從而可直接計數。所用濾膜是一種多孔硝化纖維膜或乙酸纖維膜，用水系過濾膜即可，其孔徑約0.45μm。

三、試驗原料及器材

實驗原料：伊紅美藍瓊脂平板或遠藤氏瓊脂平板，乳糖蛋白胨發酵管內有倒置小套管），滅菌水，河水或湖水；

器材：鑷子；

夾鉗；

燒杯

真空泵（天津市恒奧科技發展有限公司）；

濾膜（天津市恒奧科技發展有限公司）；

過濾器（天津市恒奧科技發展有限公司）等。

四、操作步驟

1．濾膜滅菌

　　 將濾膜放入裝有蒸餾水的燒杯中，加熱煮沸15分鐘，共煮沸三次，前兩次煮沸后換水洗滌2—3次再煮，以洗去濾膜上殘留的溶劑。

2．過濾器裝置

　　用無菌手續將已滅菌的過濾器基座、濾膜、漏斗和抽濾瓶安裝好，其中濾膜用滅菌鑷子（浸在95%酒精內，用時通過火焰滅菌）移至過濾器的基座上。其他可直接用手或夾鉗操作，但不要碰到伸入抽濾瓶的橡皮塞部分，以免染菌。

3．將抽濾瓶接上真空泵。

4．加水樣過濾

　　直徑50mm的濾膜，所過濾的水量以培養后長出的菌落數一般需要較多過濾器裝置，多于50個為適宜，所以采用多聯過濾器最好，可以減少誤差。一般清潔的深井水或經處理過的河水與湖水等可取樣 300—500 ml；對比較清潔的河水或湖水，可取樣1-100ml；嚴重污染的水樣可先進行稀釋；未知的水樣可做三個稀釋度，選擇菌落數合適的稀釋度進行計算。本次實驗于過濾器漏斗內加入比較清潔的河水或湖水100ml，加蓋。

5．開動真空泵進行油濾。

6．抽完后，加入等量的滅菌水繼續抽濾，目的是沖洗漏斗壁。

7．濾畢，關上真空泵，用滅菌鑷子取濾膜邊緣，將沒有細菌的一面緊貼在遠藤氏瓊脂平板或伊紅美藍瓊脂平板上。濾膜與培養基之間不得有氣泡。

8．將平板倒置于37℃下培養22—24小時。

9．挑取符合大腸菌群菌落特征的菌落，進行革蘭氏染色、鏡檢。

10．將鏡檢為革蘭氏陰性、無芽胞桿菌的菌落再接種一支乳糖蛋白胨發酵管，經37℃培養 24小時，產酸又產氣者即為大腸菌群陽性。