不同質(zhì)量的內(nèi)切酶，實(shí)驗(yàn)結(jié)果大不相同！

瀏覽次數(shù)：4007　發(fā)布日期：2009-4-21　來源：http://

不好的內(nèi)切酶常常被各種蛋白酶、非特異外切酶和核酸外切酶污染。使用被外切酶污染的內(nèi)切酶切割DNA，則會(huì)在切割底物的同時(shí)破壞產(chǎn)物的末端（外切酶偷偷切掉1、2個(gè)bp，瓊脂糖電泳卻看不出來），讓后續(xù)的連接、克隆和表達(dá)出現(xiàn)問題！
而NEB提供的內(nèi)切酶大部分都經(jīng)過重組改造，在最大程度上避免了外切酶污染的問題，讓你的基因安全可靠！

好的內(nèi)切酶	不好的內(nèi)切酶
· 活性高 · 品質(zhì)穩(wěn)定，保存期長(zhǎng) · 無其它核酸酶污染（包括外切酶污染）	·活性不高 ·保存一段時(shí)間后活性迅速下降 ·有其它核酸酶的污染（包括外切酶污染）

質(zhì)粒DNA

　酶切反應(yīng)　

好的內(nèi)切酶切割

　　　不好的內(nèi)切酶切割

　

完整的DNA片段

連接

　　　完整的DNA片段

　　　　　　　　　　　少量的外切酶損壞DNA末端
　　

　　　　　　　　　　　不完整的DNA片段+1、2個(gè)dNTP

連接

成功連接，克隆并表達(dá)	連接失敗，克隆不成功，無法表達(dá)或產(chǎn)物不正確

NEB EcoRV: Survival rate=49/50	Company T EcoRV: Survival rate=3/50

看看，不同質(zhì)量的內(nèi)切酶，實(shí)驗(yàn)結(jié)果大不相同！

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