植物細胞培養(yǎng)具有周期長、細胞抗剪切能力弱、易團聚等特點。同時,植物細胞規(guī)模培養(yǎng)的目的是生產(chǎn)天然產(chǎn)物,而這些天然產(chǎn)物均為細胞次生代謝物。所以,植物細胞培養(yǎng)反應(yīng)器的設(shè)計,不僅要考慮有利于細胞生長,同時還要考慮有利于產(chǎn)物的積累和分離。總體上講,適合植物細胞的反應(yīng)器應(yīng)該具有適宜的氧傳遞、良好的流動性和較低的剪切力。根據(jù)不同植物細胞生長和代謝產(chǎn)物積累的特點,目前已研究設(shè)計出多種類型的反應(yīng)器用于植物細胞培養(yǎng)。
一、懸浮培養(yǎng)生物反應(yīng)器
1機械攪拌生物反應(yīng)器
盡管機械攪拌反應(yīng)器已成功用于許多細胞的培養(yǎng)中,反應(yīng)器內(nèi)的溫度、pH、溶氧及營養(yǎng)物質(zhì)濃度較其他反應(yīng)器更易控制等優(yōu)點,但由于機械攪拌造成的剪切力對植物細胞造成較大的損傷,對次級代謝產(chǎn)物的合成也會產(chǎn)生影響,同時會帶來染菌和機械上的問題,因此需篩選出抗剪切力的細胞系,也可對反應(yīng)器結(jié)構(gòu)進行改造,尤其是攪拌槳的結(jié)構(gòu)和類型的改進,使其具有緩和、充分的攪拌效果。
2非機械攪拌式反應(yīng)器
植物細胞的培養(yǎng)比較多地采用各種非機械攪拌生物反應(yīng)器,其中常用的是氣體攪拌生物反應(yīng)器。氣體攪拌生物反應(yīng)器沒有活動的攪拌裝置,在很大程度上減少了剪切力,并能在長期操作中保持無菌。氣體攪拌生物反應(yīng)器包括鼓泡塔和氣升反應(yīng)器等。氣體攪拌生物反應(yīng)器結(jié)構(gòu)較簡單,氧傳遞效率高,剪切力低,對細胞的損傷小,容易實現(xiàn)長期無菌培養(yǎng),較適用于植物細胞培養(yǎng)。
缺點:操作彈性小,低氣速時尤其在培養(yǎng)后期細胞密度較高時,混合效果較差。如果提高通氣量,又會產(chǎn)生大量泡沫,也易于驅(qū)除培養(yǎng)液中的二氧化碳和乙烯,對細胞生長有阻礙作用。過高的溶氧對植物細胞合成次級代謝產(chǎn)物不利。
二、固定化細胞生物反應(yīng)器
1填充床生物反應(yīng)器
細胞可以位于支撐物表面,也可包埋于支撐物之中,培養(yǎng)液流經(jīng)支撐物顆粒,不斷被細胞利用。優(yōu)點:單位體積固定細胞量大。缺點:混合效果低,對必要的氧傳遞、pH、溫度控制和氣體產(chǎn)物的排除造成困難,影響細胞的培養(yǎng)。
2流化床生物反應(yīng)器
利用液體的能量來懸浮顆粒。顆粒呈流化狀態(tài)所需的能量與顆粒大小成正比,因此常采用小固定化顆粒,這些小顆粒良好的傳質(zhì)特性是流化床反應(yīng)器的優(yōu)點,缺點:剪切力和顆粒碰撞會損壞固定化細胞。
3膜生物反應(yīng)器
采用具有一定孔徑和選擇透性的膜固定植物細胞。營養(yǎng)物質(zhì)通過膜滲透到細胞中,細胞產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物通過膜釋放到培養(yǎng)液中。主要有:中空纖維反應(yīng)器和螺線式卷繞反應(yīng)器,優(yōu)點:可以重復(fù)使用。
三、植物細胞反應(yīng)器的選擇和設(shè)計
植物細胞反應(yīng)器的選擇和設(shè)計需注意:
1氧的供給對于間歇培養(yǎng),體積溶氧系數(shù)klα需要10-15h-1;
2剪切力反應(yīng)器的剪切力盡可能小;
3細胞的黏附細胞培養(yǎng)過程容易黏附在反應(yīng)器壁上,并產(chǎn)生大量的泡沫,導(dǎo)致細胞量和代謝產(chǎn)物減少,嚴重時培養(yǎng)過程被迫中止;
4細胞高密度培養(yǎng)時,混合情況變差,培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)和氧的供給不足,細胞收率下降;
5溫度、pH、營養(yǎng)物質(zhì)的濃度須控制在合適的范圍內(nèi)。