注意：在對NH2改性的色譜柱進行再生時，由于NH2可能成銨根離子的形式存在，因此應該在水洗后用0.1M的氨水沖洗，然后再用水沖洗至堿溶液完全流出。

如果簡單的有機溶劑/水的處理不能夠完全洗去硅膠表面吸附的雜質，用0.05M稀硫酸沖洗非常有效。

色譜柱的維護

1．使用預柱保護分析柱（硅膠在極性流動相/離子性流動相中有一定的溶解度）

2．大多數反相色譜柱的pH穩定范圍是2－7.5，盡量不超過該色譜柱的pH范圍

3．避免流動相組成及極性的劇烈變化

4．流動相使用前必須經脫氣和過濾處理

5．如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動相，應在實驗完畢柱子沖洗干凈，并保存大乙腈中

6．壓力升高是需要更換預柱的信號

HPLC六通閥進樣器的使用及保養

六通閥進樣器是高效液相色譜系統中最理想的進樣器，它是由圓形密封墊(轉子)和固定底座(定子)組成。美國Rheodyne公司的六通閥進樣器最為通用，各大HPLC儀器制造商均以此產品作為儀器的進樣器。

工作原理：

1、手柄位進樣(Load)位置時，樣品經微量進樣針從進樣孔注射進定量環，定量環充滿后，多余樣品從放空孔排出；

2、將手柄轉動至進樣(Inject)位置時，閥與液相流路接通，由泵輸送的流動相沖洗定量環，推動樣品進入液相分析柱進行分析。

雖然六通閥進樣器具有結構簡單、使用方便、壽命長、日常無需維修等特點，但正確的使用和維護將能增加使用壽命，保護周邊設備，同時增加分析準確度。如使用得當的話，六通閥進樣器一般可連續進樣3萬次而無需維修。

以下淺談有關六通閥進樣器的使用及保養事宜(僅供參考)：

1、手柄處于Load和Inject之間時，由于暫時堵住了流路，流路中壓力驟增，再轉到進樣位，過高的壓力在柱頭上引起損壞，所以應盡快轉動閥，不能停留在中途。在HPLC系統中使用的注射器針頭有別于氣相色譜，是平頭注射器。一方面，針頭外側緊貼進樣器密封管內側，密封性能好，不漏液，不引入空氣；另一方面，也防止了針頭刺壞密封組件及定子。

2、六通閥進樣器的進樣方式有部分裝液法和完全裝液法兩種。使用部分裝液法進樣時，進樣量最多為定量環體積的75％，如20gL的定量環最多進樣15p,L的樣品，并且要求每次進樣體積準確、相同；使用完全裝液法進樣時，進樣量最少為定量環體積的3至5倍，即20gL的定量環最少進樣60至1001aL的樣品，這樣才能完全置換樣品定量環內殘留的溶液，達到所要求的精密度及重現性。推薦采用100ul的平頭進樣針配合20ul滿環進樣。

3、可根據進樣體積的需要自已制作定量環，一般不要求精確計算定量環的體積，譬如，一根名義上10gL的定量環，實際是9gL還是1lgL并不重要，因為被測樣品和校正樣品的進樣體積保持一致，在計算結果時誤差都被抵消了。

4、進樣樣品要求無微粒和能阻死針頭及進樣閥的物質，樣品溶液均要用0．45~tm的濾膜過濾。防止微粒阻塞進樣閥和減少對進樣閥的磨損。為防止緩沖鹽和其它殘留物質留在進樣系統中，每次結束后應沖洗進樣器，通常用不含鹽的稀釋劑、水或不含鹽的流動相沖洗，在進樣閥的Load和Inject位置反復沖洗，再用無纖維紙擦凈注射器針頭的外側。

液相色譜儀色譜柱使用及維護每天用足夠的時間來平衡色譜柱，您就會在處理問題方面獲得最大的"補償"，而且您的色譜柱的壽命也會變得更長！－－－－－－ 一定得做！新的色譜柱在使用之前應該在您自己的液相色譜儀上進行性能測試，即使用色譜柱附帶的檢驗報告上測試條件和樣品來測定該色譜柱的柱效。并且，在以后的使用中，應時常對色譜柱進行測試。

卡套柱的安裝（不加預柱）

1．將卡套架套入柱芯

2．將兩片夾套片嵌入柱芯的凹槽，使柱芯高于夾套

3．將已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高過夾套片

4．將卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手擰緊

5．然后依同樣的順序連接好柱子的另一端

6．連接到液相色譜儀，PEEK接頭手擰即可；若為不銹鋼接頭應使用專用扳手

注意：使用卡套柱時，兩端的卡套應時刻連接在柱芯上。不管您是平衡色譜柱或是清洗，任何時候都不能將卡套取下來，否則會造成填料的流失。

卡套柱的安裝（加預柱）

1．將卡套架套入柱芯

2．將兩片夾套片嵌入柱芯的凹槽，使夾套高于柱芯

3．將已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高過夾套片

4．將"子彈頭"預柱放入卡套片內

5．將卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手擰緊

6．然后依同樣的順序連接好柱子的另一端

7．連接到液相色譜儀，PEEK接頭手擰即可；若為不銹鋼接頭應使用專用扳手

更換色譜柱濾網和玻璃棉過濾片（同時可以修補色譜柱）

注意：在取出反相柱芯的濾網和玻璃片之前，應該將色譜柱充分用水和甲醇/乙腈沖洗，而且修補工具的頭部也應該蘸取少量的甲醇/乙腈，以避免在取出濾網和玻璃棉濾片時帶出柱子內的填料。

1．將修補工具中的2套入柱芯的頂端

2．將修補工具中的3輕輕地旋入已套著2的柱芯中，并順時針方向旋轉到旋緊

3．一手握柱芯，另一只手輕輕地向外拉3，取出柱芯頂端的濾網

4．用一個小鏟子輕輕地取出濾網下面的玻璃棉以及被污染的填料

5．將新的填料用甲醇潤濕，然后填入挖去的部位，壓平

6．照裝上新的玻璃棉濾網，并用修補工具中的4將玻璃棉壓入柱芯頂端

7．柱芯頂端套上2，然后參照將濾網放入

8．壓緊，然后取下2，再用4將濾網的邊緣壓平

平衡色譜柱 　

反相色譜柱在經過出廠測試后是保存在乙腈/水中的。請一定確保您所使用的流動相和乙腈/水互溶。由于色譜柱在儲存或運輸過程中可能會干掉，因此在用流動相分析樣品之前，應使用10－20倍柱體積的甲醇或乙腈平衡色譜柱；如果您所使用的流動相中含有緩沖鹽，應注意用純水"過渡"。

硅膠柱或極性色譜柱在經過出廠測試后是保存在正庚烷中的。如果該色譜柱需要使用含水的流動相，請在使用流動相之前用乙醇或異丙醇平衡