人二倍體細胞來源于正常人胚胎，為人源有限傳代系，在傳代過程中保持二倍體核型，避免了傳代細胞生產所帶來的致癌性風險，具有較高安全性，也較原代動物細胞外源因子傳播風險更低，因此被廣泛應用于疫苗生產。人二倍體細胞狂犬病疫苗更是被WHO譽為狂犬病疫苗金標準，具有免疫原性好、起效速率快、安全性好、免疫持續時間長等優點。
 
中生天信和針對人二倍體細胞開發了 ToCell® HDC SLM-A低血清細胞培養基，無動物源成分，可適用于MRC5細胞和2BS細胞的低血清高密度貼壁培養。
 
HDC SLM-A細胞培養基
 
HDC SLM-A細胞培養基的特點
◆ 更低的血清添加量    
◆ 無動物源成分   
◆ 更快的生長速度    
◆ 提高生產效率 HDC SLM-A細胞培養基的應用
適用于人二倍體細胞低血清高密度貼壁培養環境，并滿足水痘、狂犬、乙腦、甲肝等疫苗工藝生產需求。
 
人二倍體細胞低血清培養工藝
 
方瓶培養
以2BS細胞為例：
（1）接種密度：4.5×10⁶cells/T75。
（2）培養液：30ml。
（3）傳代時間：72-96h。
（4）傳代依據：細胞在方瓶中長成致密單層后進行傳代。
（5）培養液pH：不得低于7.0。
細胞工廠培養
   細胞復蘇后從方瓶擴增至細胞工廠，一個5層細胞工廠接種100×10⁶cells（按3×10⁴cells/cm²），加培養液150-200ml/層，培養3-4天，待細胞長成致密單層后進行傳代。
細胞工廠傳代：
（1）緩慢棄去細胞工廠中的培養液，加入PBS潤洗1-2遍。
（2）棄去PBS后加入約25ml/層0.25%胰酶溶液（若使用無EDTA的胰酶，可適當延長消化時間）。
（3）充分浸潤細胞1-2min后，棄去胰酶，將細胞工廠置于37℃溫箱5-6min。
（4）鏡檢90%以上細胞均變圓變亮后拍打細胞工廠，使細胞分散。
（5）再加入新鮮培養液重懸細胞，并晃動細胞工廠，使細胞從細胞工廠完全脫落。
（6）將重懸好的細胞倒入無菌容器混勻后取樣計數，進行下一步擴增、培養。
 
注意事項
（1）保證細胞來源可靠，并檢測無支原體及外源病毒污染。
（2）人二倍體細胞連續傳代次數有限，需采用低代次細胞用于實驗。
（3）每次傳代使用新的方瓶、細胞工廠。
（4）棄液時，盡量棄于滅菌容器中，減小污染風險。
（5）細胞工廠接種需加入培養基充分混勻細胞，保證每層細胞數相對均勻。
（6）培養過程中觀察細胞時盡可能不要過度晃動細胞工廠，防止已貼壁的細胞有局部脫落可能。
 
異常處理
（1）培養過程中盡可能分開進行種細胞傳代。
（2）如遇細胞培養中培養液渾濁，請選擇當天不進行細胞實驗的房間進行取樣鏡檢，鏡檢下有明顯游動的微生物則很可能是細菌污染，若不是特別明顯可取一些培養液在TSA平板中培養24-72h觀察。
（3）如遇培養液清澈，但細胞生長明顯受限或死亡，請選擇當天不進行細胞實驗的房間進行取樣，進行支原體或外源病毒檢測。
（4）確定污染后務必棄去所有污染細胞、停用使用中的培養基，對實驗環境進行徹底消毒滅菌后再進行下批實驗。
 
 
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