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豬瘟病毒抗體檢測試劑盒(酶聯免疫法)使用說明書

瀏覽次數:1998 發布日期:2024-9-2  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
豬瘟病毒抗體檢測試劑盒(酶聯免疫法)使用說明書

【產品名稱】
通用名:豬瘟病毒抗體檢測試劑盒(酶聯免疫法)
英文名:Test Kit for Antibodies to Classical Swine Fever Virus (ELISA)

【包裝規格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

【預期用途】 豬瘟是由豬瘟病毒(Classical Swine Fever Virus,CSFV)引起的豬的一種高度接觸性、出血性和致死性傳染病,其特征為高熱稽留和微血管壁變性而引起的廣泛出血、壞死、梗塞等,慢性以纖維素壞死性腸炎為特征。
本試劑用于檢測豬血清中豬瘟病毒抗體,可用于豬瘟病毒疫苗免疫效果評價。

【原    理】
本試劑盒由預包被豬瘟病毒重組E2蛋白的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成,應用酶聯免疫法(ELISA)原理檢測豬血清、血漿樣本中豬瘟病毒抗體。實驗時在酶標板中加入對照血清和待檢樣本,經溫育后若樣品中含有豬瘟病毒抗體,則將與酶標板上抗原結合,經洗滌除去未結合的其他成分后;再加入酶標記物,與酶標板上抗原抗體復合物發生特異性結合;再經洗滌除去未結合的酶標記物,在孔中加TMB底物液,與酶標結合物反應形成藍色產物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關;加入終止液終止反應后,產物變為黃色;用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值,即可知樣品是否含有豬瘟病毒抗體。

【試劑盒組成】
序號 名稱 規格/96T×1 規格/96T×2 規格/96T×5
1 酶標記物 11ml×1(紅蓋) 11ml×2(紅蓋) 26ml×2(紅蓋)
2 樣品稀釋液 50ml×1(黃蓋) 50ml×1(黃蓋) 200ml×1(透明)
3 20X濃縮洗滌液 40ml×1(白蓋) 40ml×1(白蓋) 200ml×1(透明)
4 底物液A 6ml×1(白蓋) 11ml×1(白蓋) 26ml×1(白蓋)
5 底物液B 6ml×1(黑蓋) 11ml×1(棕蓋) 26ml×1(黑蓋)
6 終止液 6ml×1(黃蓋) 11ml×1(黃蓋) 26ml×1(黃蓋)
7 陽性對照 1.0 ml×1(紅蓋) 1.5 ml×1(紅蓋) 2.0 ml×1(紅蓋)
8 陰性對照 1.0 ml×1(綠蓋) 1.5 ml×1(綠蓋) 2.0 ml×1(綠蓋)
9 酶標板 96T×1 96T×2 96T×5
10 蓋板膜 1 2 5
11 自封袋 1 1 2
12 說明書 1 1 1
13 稀釋板 1 2 5
 
【儲存及有效期】2~8℃保存,有效期12個月。
    包被板開封后請于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限為2個月。

【適用儀器】 含450nm、630nm波長的酶標儀,37℃恒溫設備,可調微量移液器。

【樣品準備】
1.取動物全血按常規方法制備血清,要求血清清亮,無溶血、無污染。樣品1周內可于2~8℃保存,長期需置-20℃保存。
2.用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋(如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中,混勻)。陰、陽性對照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。

【檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復至室溫。
2.取所需用量酶標板條,設陰性/陽性對照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。
3.陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
4.混勻,蓋好蓋板膜,置37℃(推薦水浴)避光反應30分鐘。
5.甩去孔內液體,每孔加350μl工作洗滌液,靜置30秒后棄去,重復洗滌5次,最后一次拍干。
6.每孔加酶標記物100μl,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應30分鐘。
7.洗滌,同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混勻,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應10分鐘。
9.每孔加終止液50μl,混勻,于450nm(可用630nm作參比波長)測定各孔吸光值。 

【參考值】 實驗正常的情況下,陰性對照的平均OD值即ODNC應≤0.3,陽性對照的平均OD值即ODPC應≥0.6。

【檢驗結果的判定】
1.樣品的OD值即ODS;
2.閾值計算:SP值=(ODS-ODNC)/(ODPC-ODNC);
SP值≥0.2,結果判定為陽性;SP值<0.2,結果判定為陰性。
3.本實驗結果為陰性時表明豬只抗體水平不足,建議補打相應疫苗。

【試驗方法的局限性】
該試驗僅作為定性檢測豬血清、血漿中豬瘟病毒抗體,根據SP值高低可作抗體水平強、中、弱的粗略評估。

【注意事項】
1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣,嚴格健全和執行消毒隔離制度,各種實驗廢棄物都應按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性,應避免接觸皮膚和衣物,如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。
3.酶標板從冷藏環境中取出時應恢復至室溫方可開袋,未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時容易結晶,使用時需恢復至室溫以完全溶解。
5.洗滌時各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測的樣品應保持新鮮。
7.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數為準。
8.不同批號試劑組分不得混用。
發布者:上海雅吉生物科技有限公司
聯系電話:021-34661276
E-mail:58268971@qq.com

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