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巨噬細(xì)胞介紹以及M1/M2極化實驗操作步驟

瀏覽次數(shù):5414 發(fā)布日期:2023-10-24  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
      巨噬細(xì)胞是一類位于外周血、炎癥組織中的白細(xì)胞,屬于免疫細(xì)胞中單核細(xì)胞類群,主要通過吞噬細(xì)菌、死亡細(xì)胞或細(xì)胞殘片參與非特異性免疫調(diào)節(jié),巨噬細(xì)胞將信號傳遞給其他淋巴細(xì)胞及其他免疫細(xì)胞參與特異性免疫調(diào)調(diào)節(jié)。
 

 
       巨噬細(xì)胞進(jìn)入血液中以單核細(xì)胞前體形式存在,當(dāng)單核細(xì)胞浸潤到組織中,會分化成巨噬細(xì)胞,巨噬細(xì)胞主要存在于淋巴結(jié)、肺泡壁、骨髓、肝臟以及脾臟等組織中。巨噬細(xì)胞根據(jù)功能以及炎癥分泌水平分為M1型和M2型巨噬細(xì)胞兩種亞群。M1巨噬細(xì)胞主要由LPS及IFNγ激活,分泌IFN-γ、TNF-α等促炎癥因子;M2巨噬細(xì)胞主要由IL4、IL13、M-CSF等激活,主要分泌IL10等抗炎癥因子。

       巨噬細(xì)胞的通常鑒定方式為流式細(xì)胞術(shù)或者免疫熒光實驗,一般是通過一些巨噬細(xì)胞標(biāo)志物進(jìn)行的,常見的人和小鼠M1巨噬細(xì)胞標(biāo)志物有CD68、CD80、CD86、CD32等;常見人和小鼠M2巨噬細(xì)胞標(biāo)志物有CD206、CD204、CD163等。

       這2種亞群的作用:①作為抗原提呈細(xì)胞;②殺傷腫瘤效應(yīng)細(xì)胞;③巨噬細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的機(jī)制;④活化的巨噬細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞結(jié)合后,通過釋放溶解細(xì)胞酶直接殺傷腫瘤細(xì)胞;⑤處理和呈遞腫瘤抗原,激活T細(xì)胞以產(chǎn)生特異性抗腫瘤細(xì)胞免疫應(yīng)答;⑥巨噬細(xì)胞表面上有FC受體,可通過特異性抗體介導(dǎo)ADCC效應(yīng)殺傷腫瘤細(xì)胞;⑦活化的巨噬細(xì)胞可分泌腫瘤壞死因子(TNF)等細(xì)胞毒性因子和產(chǎn)生超氧化代謝產(chǎn)物間接殺傷腫瘤細(xì)胞。

       基礎(chǔ)科學(xué)實驗中使用的細(xì)胞巨噬細(xì)胞模型種類很多,來源不同種屬不同需要的誘導(dǎo)因子的時長和濃度均不相同,后續(xù)的機(jī)制也有所差異;常使用細(xì)胞有小鼠RAW264.7巨噬細(xì)胞、人THP1單核細(xì)胞、小鼠BMDM骨髓細(xì)胞等;一般巨噬細(xì)胞研究主要使用人種屬細(xì)胞系或者小鼠細(xì)胞系。而動物實驗研究巨噬細(xì)胞的造模更多是偏向于炎癥模型,例如急性肺損傷模型。下列給大家簡單介紹。
 
(1)THP-1(人單核細(xì)胞)
THP-1是來自急性單核細(xì)胞白血病患者血液分離而來,在基礎(chǔ)科研實驗中,常常誘導(dǎo)分化為巨噬細(xì)胞來進(jìn)行機(jī)制研究;THP-1通常受PMA(佛波酯)150nmol/L誘導(dǎo)24h即可分化為巨噬細(xì)胞,然后在PMA持續(xù)存在的情況下,LPS(100ng/ml)、IFNγ(20ng/ml)誘導(dǎo)48h,產(chǎn)生M1巨噬細(xì)胞;IL4(20ng/ml)、IL13(20ng/ml)誘導(dǎo)48h,產(chǎn)生M2巨噬細(xì)胞;
 
 
(2)RAW264.7細(xì)胞(小鼠單核巨噬細(xì)胞)
      RAW264.7細(xì)胞是主要炎癥模型、巨噬細(xì)胞極化等體外研究細(xì)胞,廣泛用于急性肺損傷、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等模型中;LPS(200ng/ml),12h可以誘導(dǎo)此細(xì)胞向M1分化,產(chǎn)生炎癥因子,10ng/ml IL-4誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞12h可以產(chǎn)生M2細(xì)胞。
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