關(guān)于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的步驟及注意事項(xiàng)
本法系利用鱟試劑來檢測或量化由革蘭陰性菌產(chǎn)生的細(xì)菌內(nèi)毒素，以判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法。
細(xì)菌內(nèi)毒素檢查包括兩種方法，即凝膠法和光度測定法，后者包括濁度法和顯色基質(zhì)法。供試品檢測時(shí)，可使用其中任何一種方法進(jìn)行試驗(yàn)。當(dāng)測定結(jié)果有爭議時(shí)，除另有規(guī)定外，以凝膠限度試驗(yàn)結(jié)果為準(zhǔn)。
本試驗(yàn)操作過程應(yīng)防止內(nèi)毒素的污染。
細(xì)菌內(nèi)毒素的量用內(nèi)毒素單位（EU）表示，1EU與1個(gè)內(nèi)毒素國際單位（IU）相當(dāng)。
細(xì)菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品系自大腸埃希菌提取精制，并以細(xì)菌內(nèi)毒素國際標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定其效價(jià)。用于標(biāo)定、復(fù)核、仲裁鱟試劑靈敏度、標(biāo)定細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品的效價(jià)，干擾試驗(yàn)及檢查法中編號B和C溶液的制備、凝膠法中鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)、光度測定法中標(biāo)準(zhǔn)曲線可靠性試驗(yàn)。
細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品系以細(xì)菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品為基準(zhǔn)標(biāo)定其效價(jià)，用于干擾試驗(yàn)及檢查法中編號B和C溶液的制備、凝膠法中鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)、光度測定法中標(biāo)準(zhǔn)曲線可靠性試驗(yàn)。
細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水應(yīng)符合滅菌注射用水標(biāo)準(zhǔn)，其內(nèi)毒素含量小于0.015EU/ml（用于凝膠法）或小于0.005EU/ml（用于光度測定法），且對內(nèi)毒素試驗(yàn)無干擾作用。
鱟試劑是從鱟的血液中提取出的凍干試劑，可以與細(xì)菌內(nèi)毒素發(fā)生凝集反應(yīng)。除了內(nèi)毒素，鱟試劑還與某些β-葡聚糖反應(yīng)，產(chǎn)生假陽性結(jié)果。如遇含有β-葡聚糖的樣品，可使用去G因子鱟試劑或G因子反應(yīng)抑制劑來排除鱟試劑與β-葡聚糖的反應(yīng)。
試驗(yàn)所用的器皿需經(jīng)處理，以去除可能存在的外源性內(nèi)毒素。耐熱器皿常用干熱滅菌法（250℃、至少30分鐘）去除，也可采用其他確證不干擾細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的適宜方法。若使用塑料器具，如微孔板和與微量加樣器配套的吸頭等，應(yīng)選用標(biāo)明無內(nèi)毒素并且對試驗(yàn)無干擾的器具。
供試品溶液的制備
某些供試品需進(jìn)行復(fù)溶、稀釋或在水性溶液中浸提制成供試品溶液。必要時(shí)，可調(diào)節(jié)被測溶液（或其稀釋液）的pH值，一般供試品溶液和鱟試劑混合后溶液的pH值在6.0~8.0的范圍內(nèi)為宜，可使用適宜的酸、堿溶液或緩沖液調(diào)節(jié)pH值。酸或堿溶液須用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水在已去除內(nèi)毒素的容器中配制。所用溶劑、酸堿溶液及緩沖液應(yīng)不含內(nèi)毒素和干擾因子。
細(xì)菌內(nèi)毒素檢查包括兩種方法，即凝膠法和光度測定法，后者包括濁度法和顯色基質(zhì)法。供試品檢測時(shí)，可使用其中任何一種方法進(jìn)行試驗(yàn)。當(dāng)測定結(jié)果有爭議時(shí)，除另有規(guī)定外，以凝膠限度試驗(yàn)結(jié)果為準(zhǔn)。
本試驗(yàn)操作過程應(yīng)防止內(nèi)毒素的污染。
細(xì)菌內(nèi)毒素的量用內(nèi)毒素單位（EU）表示，1EU與1個(gè)內(nèi)毒素國際單位（IU）相當(dāng)。
細(xì)菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品系自大腸埃希菌提取精制，并以細(xì)菌內(nèi)毒素國際標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定其效價(jià)。用于標(biāo)定、復(fù)核、仲裁鱟試劑靈敏度、標(biāo)定細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品的效價(jià)，干擾試驗(yàn)及檢查法中編號B和C溶液的制備、凝膠法中鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)、光度測定法中標(biāo)準(zhǔn)曲線可靠性試驗(yàn)。
細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品系以細(xì)菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品為基準(zhǔn)標(biāo)定其效價(jià)，用于干擾試驗(yàn)及檢查法中編號B和C溶液的制備、凝膠法中鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)、光度測定法中標(biāo)準(zhǔn)曲線可靠性試驗(yàn)。
細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水應(yīng)符合滅菌注射用水標(biāo)準(zhǔn)，其內(nèi)毒素含量小于0.015EU/ml（用于凝膠法）或小于0.005EU/ml（用于光度測定法），且對內(nèi)毒素試驗(yàn)無干擾作用。
鱟試劑是從鱟的血液中提取出的凍干試劑，可以與細(xì)菌內(nèi)毒素發(fā)生凝集反應(yīng)。除了內(nèi)毒素，鱟試劑還與某些β-葡聚糖反應(yīng)，產(chǎn)生假陽性結(jié)果。如遇含有β-葡聚糖的樣品，可使用去G因子鱟試劑或G因子反應(yīng)抑制劑來排除鱟試劑與β-葡聚糖的反應(yīng)。
試驗(yàn)所用的器皿需經(jīng)處理，以去除可能存在的外源性內(nèi)毒素。耐熱器皿常用干熱滅菌法（250℃、至少30分鐘）去除，也可采用其他確證不干擾細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的適宜方法。若使用塑料器具，如微孔板和與微量加樣器配套的吸頭等，應(yīng)選用標(biāo)明無內(nèi)毒素并且對試驗(yàn)無干擾的器具。
供試品溶液的制備
某些供試品需進(jìn)行復(fù)溶、稀釋或在水性溶液中浸提制成供試品溶液。必要時(shí)，可調(diào)節(jié)被測溶液（或其稀釋液）的pH值，一般供試品溶液和鱟試劑混合后溶液的pH值在6.0~8.0的范圍內(nèi)為宜，可使用適宜的酸、堿溶液或緩沖液調(diào)節(jié)pH值。酸或堿溶液須用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水在已去除內(nèi)毒素的容器中配制。所用溶劑、酸堿溶液及緩沖液應(yīng)不含內(nèi)毒素和干擾因子。
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