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Cre模式小鼠助力Cre-loxP重組系統實現時空特異性打靶

瀏覽次數:1415 發布日期:2023-8-4  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
超強輔助Cre鼠
 
Cre-loxP重組系統能實現時空特異性打靶

這其中少不了Cre鼠的助力

有小伙伴@沒有蛋糕和汽水這樣評價道:

“沒有Cre鼠,flox鼠敲得再完美也沒有意義。果然每一只flox鼠都在尋找它的Cre鼠。”

那么,屏幕前的你是否還缺一只合適好用的Cre鼠呢?

快來把flox鼠的這位好搭檔帶回家吧!

 

工具鼠模型推薦

Cre鼠常用于與flox鼠雜交進行條件性基因敲除,也有研究將其用于切割位于報告基因前的終止序列,以達到熒光標記特定細胞的目的。改造并優化Cre,結合細胞/組織特異性的調控元件,可實現時空條件性靶基因敲除/表達。

 

賽業生物藥物篩選評價小鼠模型平臺可為研究人員提供Cre工具鼠、誘導型Cre工具鼠、熒光標記模型等多類型工具鼠模型,助力新藥研發。

 


模型驗證——以Cx3cr1-iCre小鼠為例

Cx3cr1-iCre小鼠與Rosa26-LSL-tdTomato小鼠交配,產生雙基因雜合子代小鼠,Cre酶介導的重組將導致tdTomato蛋白在子代Cre陽性細胞中表達。分別采集7周齡子代小鼠的腦、皮膚、肝、腎、腸、脾和肺組織等組織,通過免疫熒光染色觀察Cre重組酶的表達情況。其基因型為——實驗組(Cre+):Cx3cr1-iCre[KI/+];Rosa26-LSL-tdTomato[CKI/+];對照組(Cre-):Rosa26-LSL-tdTomato[CKI/CKI]。


1.Cre重組酶腦部的表達情況

超強輔助Cre鼠

腦部組織免疫熒光染色

Cre+(Cx3cr1-iCre[KI/+];Rosa26-LSL-tdTomato[CKI/+])小鼠在腦部組織中存在大量的tdTomato蛋白紅色熒光,其表達與小膠質細胞標記物IBA1的表達的存在共定位,表明在腦部小膠質細胞中存在大量的Cre重組酶表達,而對照組(Cre-)小鼠中檢測不到tdTomato紅色熒光的表達,不存在Cre重組酶的表達。

2.Cre重組酶在皮膚組織中的表達情況

超強輔助Cre鼠

皮膚組織免疫熒光染色

Cre+(Cx3cr1-iCre[KI/+];Rosa26-LSL-tdTomato[CKI/+])小鼠在皮膚組織中存在大量的tdTomato蛋白紅色熒光,表明在該部位存在大量的Cre重組酶表達,表達的細胞可能是巨噬細胞。而對照組(Cre-)中的紅色熒光是由于Rosa26-LSL-tdTomato品系小鼠自身的泄漏造成的(內部數據顯示Rosa26-LSL-tdTomato小鼠有幾率在皮膚出現輕微泄漏,但在其它部位并不存在泄漏)。

3.Cre重組酶在肺、腎、肝和腸道的表達情況

超強輔助Cre鼠

肺、腎、肝和腸道免疫熒光染色

Cre+小鼠在肺部、腎臟、肝臟和腸道的部分組織中存在tdTomato蛋白紅色熒光,表明在這些部位存在Cre重組酶表達,表達的細胞可能為巨噬細胞。而對照組(Cre-)小鼠中檢測不到tdTomato紅色熒光的表達,不存在Cre重組酶的表達。

4.Cre重組酶在脾臟的表達情況
 

超強輔助Cre鼠

脾臟免疫熒光染色

Cre+小鼠在脾臟中存在少量的tdTomato蛋白紅色熒光,表明在脾臟中Cre重組酶表達較低。而對照組(Cre-)小鼠中檢測不到tdTomato紅色熒光的表達,不存在Cre重組酶的表達。

總結
Cx3cr1-iCre小鼠模型中Cre重組酶的表達主要定位于腦組織小膠質細胞中,也可以在腸道、肺部、肝臟和皮膚的部分部位檢測到Cre重組酶介導的重組,這些發生重組的細胞可能是巨噬細胞,此外,在脾臟中也存在少量的重組信號。綜上所述,該模型可作為小膠質細胞及其他組織巨噬細胞類型工具鼠使用。

發布者:賽業(蘇州)生物科技有限公司
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