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免疫組化技術專題第5期:抗原修復液PH值、溫度和時間的選擇

瀏覽次數:4220 發布日期:2022-11-28  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

通過免疫組化技術專題前幾期的內容,我們知道常規石蠟切片標本做免疫組化實驗是需要做抗原修復,這就要用到抗原修復液,因為抗原修復液會直接影響抗原修復效果,本期就跟大家一起探討抗原修復液的PH值、溫度和時間等,該如何選擇。

抗原修復液的pH值的選擇
1、首先我們知道沒有一種抗原修復液能適合于所有的抗體,因為不同pH的抗原修復液其pH比化學成分對抗原修復起到作用更大,雖然多數抗體在抗原修復液全范圍pH均能使抗原決定簇進行有效修復,但針對性選擇不同pH的修復液,效果會更佳。常見抗原修復液如下:

 
種類 功能
pH6.0的枸櫞酸鹽緩沖液 擴張細胞膜及核膜的微細膜孔,增加膜的通透性
pH9.0的Tris-EDTA(乙二胺四乙酸) 消除甲醛溶液固定產生的不利因素


2、常用的0.01mol/L枸櫞酸鹽緩沖液(pH6.0)對大多數抗原來說并不是最好的修復液,如進行 ER染色時,用pH7.0比pH6.0要好。

總體看:大部分組織抗原適合的修復液應接近活體細胞的pH(7.0~7.4)。

抗原修復液的溫度和時間選擇
相較于修復液的種類和pH,對抗原修復影響更大的因素是修復液的溫度和時間。建議溫度保持在95℃作用時間為15~20分鐘。反之溫度或時間不夠會使染色強度大幅度減弱,甚至呈現陰性結果,影響切片結果的診斷。

溫馨提醒
染色失敗應主要從抗體質量及操作中找原因。光密度值0.03以下在光鏡下看不到棕色顆粒,這些小數值的出現可能是顯色液中 DAB在背景中沉著所致。

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【參考文獻】
病理技術大講堂1001問-病理技術操作疑難點解惑答疑. 席越,陳軍主編.人民衛生出版社

發布者:深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司
聯系電話:400-966-9516
E-mail:rwd@rwdls.com

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