SYBR Green熒光染料是 dsDNA 結合染料。在它與dsDNA ，結合后熒光會增加一百倍以上（圖 8a）。雖然它在一定程度上與 PCR 兼容，但在較高的濃度下會 抑制 PCR 反應。在 LightCycler 儀器中，SYBR 通常 在通道 F1 中顯現。SYBR 的優點是它可以與任何 dsDNA 結合；無需設計和優化探針�？梢杂行�提高定量PCR的效率，當熒光染料 SYBR Green I 與 DNA 雙螺旋結合時，在溶液中，未結合的染料顯示出較小的熒光，而當它與DNA 結合后熒光就會急劇增強。

由于 SYBR Green I 染料較為穩定（在 30 次擴增循環中僅損失 6% 的活性）并且 LightCycler 儀器的濾光片組與激發和發射波長相匹配，所以它常常被用于測量總 DNA 。

SYBR Green I 染料在PCR檢測中的步驟原理：
原理如下圖所示。
在擴增開始時，反應混合物含有變性的 DNA、引物和染料。未結合的染料分子發出微弱的熒光，產生最小的背景熒光信號，在計算機分析過程中將其減去。
   
引物退火后，一些染料分子可以與雙鏈結合。DNA 結合導致 SYBR Green熒光染料分子在激發時發光顯著增加。

 
 
在延伸過程中，越來越多的染料分子與新合成的 DNA 結合。如果連續監測反應，可以實時觀察熒光的增加。在 DNA 變性進行下一個加熱循環時，染料分子被釋放，熒光信號下降。
 
在每個 PCR 循環的延伸步驟結束時進行熒光測量，以監測擴增 DNA 的增加量。SYBR Green I 格式與 PCR 之后進行的熔解曲線分析一起，為特定產品的鑒定和定量提供了有利的驗證。
 
SYBR Green I (SG) 作為嵌入型染料廣泛用于實時 PCR 應用，并以未公開的濃度包含在許多市售試劑盒中。SG 與雙鏈DNA 的結合是非特異性的，需要額外的測試，例如 DNA 熔解曲線分析，以確認特異性擴增子的產生。熔解曲線分析的使用消除了瓊脂糖凝膠電泳的必要性，因為特定擴增子的熔解溫度 (Tm)類似于電泳條帶的檢測。當使用 SG 進行實時 PCR 多重反應時，只要 Tm 值足夠，應該可以區分擴增子不同的。

使用市售試劑盒和內部 SG 預混液對霍亂弧菌和嗜肺團菌進行的實時多重檢測強調了性能特征的可變性，特別是僅檢測到 Tm 分析評估的單一產品，但檢測到瓊脂糖凝膠評估的多個產品電泳。檢測到的 Tm 對應于具有更高 G+C% 和更大尺寸的擴增子，表明在 PCR 期間 SG 優先結合，并導致當存在的 SG 數量有限時無法在多重反應中檢測到多個擴增子。這對使用SYBR Green熒光染料 SG診斷實時 PCR 檢測的設計和常規應用具有影響。