外泌小體（Exosome）是一種囊泡結構，直徑通常在30-150nm，常見于正常體液和病理樣本，培養細胞也可分泌。研究人員已經在血液、唾液、尿液、母乳等中發現外泌小體，其運載的蛋白和核酸涉及其細胞間物資、信息交流，影響和調控著多方面的生理功能，包括腫瘤發生、免疫促進、凋亡調控、血管生成、炎癥反應及發育和分化等。由于在體液中出現，外泌小體對于臨床生物標志物檢測特別有利，成為體外診斷、biomarker研究的新熱點。
 
 
 
分泌和膜出芽生成囊泡

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免疫調控

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神經元-神經膠質通訊

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腫瘤演進

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近年來隨著分離純化技術的提高，關于外泌小體的研究成果頗豐；這進一步吸引了越來越多領域的課題將外泌體納入研究對象。研究的前提是方便、高效、標準化地分離純化外泌小體。經過近20年的探索，已經建立了超速離心法、沉淀法、色譜法、親和純化法等。
 
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經典超速離心法制備外泌體

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超速離心法是制備外泌體的金標方法，
但是有所局限：

• 設備非常昂貴
• 對經驗要求較高
• 操作時間長，有一定的安全風險

100,000×g離心，操作時長超過5個半小時
 
在大量實踐中大家逐漸認識到根據下游研究對樣品的要求，以及起始樣品的規模、數量，可以選擇不同的外泌體制備策略。因不需要特殊的設備和試劑盒，對操作人員也沒有特別的經驗要求，超濾法后來居上，成為實驗室中制備外泌體的通用方法。
 
 
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過濾+超濾
簡單兩步，快捷制備外泌體
 

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根據起始樣品量選擇合適規格的過濾和超濾工具
 

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制備的外泌體用于細胞學或動物實驗前需要做無菌處理

Ultrafree離心式微濾管
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TIPS

• 無血清樣品選擇3KD孔徑為了盡可能提高外泌體的回收率。 
• 有血清樣品選擇100KD/500KD孔徑為了盡可能去除細胞分泌蛋白以及血清成分中的白蛋白影響。 
• 樣品體積大于30mL時可以考慮用超濾杯或Centricon 70，注意超濾杯在200mL以內時吸附損耗可能較超濾管有所增加。

 
 
不同方法制備外泌小體產量比較

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默克生命科學超濾法制備的外泌小體電鏡照片（放大倍數87000×)。小體直徑16 - 82nm，有些達到485nm。

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進一步精制……
經過簡便的“微濾澄清+超濾富集”兩步法，制備的外泌體可直接用于下游各種分析，如果需要純度更高的外泌體，可以采用抗體包被的瓊脂糖珠或磁珠進一步純化。
 
抗體包被磁珠親和純化

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