【原理概述】

本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴增技術：在常溫恒溫下，特殊修飾的反轉錄酶利用特異性引物和模板RNA合成cDNA鏈，反應體系中的重組酶、單鏈 DNA 結合蛋白和 DNA 聚合酶以新合成的 cDNA 鏈為模板進行快速核酸擴增反應。依賴nfo 酶的作用，加入根據模板設計的特異的分子探針，使用膠體金技術（三明治夾心法）可以對最終結果進行檢測。

【產品特點】

本試劑盒具有靈敏度高、特異性強、反應時間短（僅需 12 min）等優點，反應組分為干粉狀態，操作簡便，易于保存。本試劑對設備要求低，金屬浴、水浴鍋等即可進行反應操作，無需購買 PCR 擴增儀等價格高昂的專屬設備。

【引物設計】

建議使用長度在 30-35 bp 的引物，引物過短會影響擴增速度和檢測靈敏度；下游引物的 5’端標記一個修飾基團（常用生物素）。引物設計避免形成二級結構而影響擴增；擴增

子長度建議在 150-500 bp。

【熒光探針設計】

在上下游引物中間，設計一段長度為46-52nt與目的片段互補的序列；5’端修飾一個抗原標記（典型 FAM）;在 5’端和 3’末端的中部位置標記一個 dSpacer（四氫呋喃，THF），作為 nfo 的識別位點；3’末端標記一個修飾基團，例如胺基、磷酸基團或 C3-Spacer 等。

【試劑盒組成】

注：考慮到核酸降解問題，RNA 系列產品不提供正對照模板和引物探針。

【試劑盒儲存】

1．運輸溫度：≤ 20 ºC的恒溫環境；

2．儲存條件：儲存溫度 ≤ -20 °C（± 5 °C）恒溫環境，避光保存，避免重壓、反復凍融；

3．產品有效期：14個月；

4．生產日期見外包裝。

【注意事項】

1. 由于試劑盒靈敏度非常高，在進行反應時請注意避免核酸污染，并設置空白對照；

2. 使用時請取出實驗所需的 MIRA 反應單元的數量，剩余部分請置于存儲條件下。