隨著生物醫(yī)藥行業(yè)的迅猛發(fā)展，越來越多的生物制品正逐步應(yīng)用于人類健康的維護(hù)與治療，其中包括治療性抗體藥物、細(xì)胞治療以及病毒載體疫苗等，這些產(chǎn)品的需求呈現(xiàn)出快速增長(zhǎng)的趨勢(shì)。與傳統(tǒng)口服類藥物相比，生物制品通常通過注射等方式直接進(jìn)入人體，因此，對(duì)其安全性和有效性提出了更高要求。其中，宿主核酸殘留作為潛在的傳染性和致瘤性風(fēng)險(xiǎn)，成為生物制品安全監(jiān)管中至關(guān)重要的環(huán)節(jié)。
 

一、HCD殘留控制的法規(guī)要求

世界衛(wèi)生組織（WHO）、國(guó)家藥品監(jiān)督管理局藥品評(píng)審中心（CDE）以及各國(guó)政府均針對(duì)生物制品中宿主核酸殘留制定了嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)定。例如，疫苗和治療類生物制品中的DNA殘留量通常被嚴(yán)格控制在每劑量100pg以下，《體內(nèi)基因治療產(chǎn)品藥學(xué)研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》中建議：“如有可能，建議盡量將殘留DNA控制在10ng/劑以內(nèi)，DNA殘留片段的大小控制在200bp以下。”
 

表一.《中國(guó)藥典》(2020版)部分生物制品殘留DNA限度要求

二、HCD殘留控制的挑戰(zhàn)

全能核酸酶，又稱非限制性核酸內(nèi)切酶，是一種來源于Serratia Marcescen的非特異性核酸內(nèi)切酶，可以降解各種形式的（雙鏈，單鏈，線狀，環(huán)狀，天然或變性）DNA和RNA，已廣泛應(yīng)用于上市藥品生產(chǎn)過程中的宿主核酸控制。雖然在生理鹽條件下的體外水解實(shí)驗(yàn)中，這類酶可以迅速降解宿主DNA，但在復(fù)雜的工藝條件下使用仍面臨著眾多挑戰(zhàn)。

1、宿主DNA通常以染色質(zhì)形式存在，易被蛋白質(zhì)包裹，導(dǎo)致DNA難以暴露。但在高鹽環(huán)境下，核酸與蛋白質(zhì)可有效分離，從而使核酸去除更加簡(jiǎn)便。

2、對(duì)于AAV等病毒載體，會(huì)因?yàn)殪o電相互作用而發(fā)生聚集，這種聚集會(huì)降低病毒穩(wěn)定性，從而影響得率，因此提高鹽濃度，可以有效減少AAV病毒顆粒的聚集，從而提高其得率。

3、在純化的工藝過程中，有些需要利用高鹽洗脫的層析樣品，其宿主細(xì)胞核酸含量偏高，則需要采取相應(yīng)措施降低宿主核酸含量。

除此之外，傳統(tǒng)全能核酸酶的活性會(huì)隨著鹽濃度升高而急劇下降，在中、高鹽條件使用這類核酸酶會(huì)造成生產(chǎn)成本顯著增加。

三、逐典耐高鹽全能核酸酶，不同鹽濃度耐受，總有一款適合您！

Pannarase耐高鹽全能核酸酶

Pannarase在150 mM Na+濃度條件下酶活性最高

圖1.Pannarase耐高鹽全能核酸酶耐鹽曲線

圖2.Pannarase耐高鹽全能核酸酶酶切數(shù)據(jù)

Pannarase耐高鹽全能核酸酶（SAN），更高鹽耐受型

Pannarase耐高鹽全能核酸酶（SAN），更高鹽耐受型在600~700 mM Na+濃度條件下酶活性最高

圖3.Pannarase耐高鹽全能核酸酶（SAN），更高鹽耐受型耐鹽曲線

圖4.Pannarase耐高鹽全能核酸酶（SAN），更高鹽耐受型酶切數(shù)據(jù)