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LNCaP clone FGC細胞平衡后成團嚴重的原因及解決方案

瀏覽次數(shù):1358 發(fā)布日期:2023-1-9  來源:尚恩生物

細 胞 基 本 信 息


▲LNCaP clone FGC細胞正常生長形態(tài)照片

細胞名稱:LNCaP clone FGC(人前列腺癌細胞) 

細胞別稱:LNCaP-Clone-FGC; LNCaP.FGC; LNCaP-FGC; LNCaP FGC; LNCAPCLONEFGC; LNCaP-ATCC

細胞貨號:SNL-356 

培養(yǎng)條件:1640+10% FBS+1% P/S 

培養(yǎng)環(huán)境:空氣,95%;二氧化碳 (CO2),5%
 

細胞簡介:人前列腺癌細胞LNCaP clone FGC是從一位50歲白人男性(血型B+)的左鎖骨淋巴結(jié)針刺活檢中分離,該患者經(jīng)確診為前列腺癌轉(zhuǎn)移。LNCaP clone FGC細胞對5-α-二氫睪酮(生長調(diào)節(jié)子和酸性磷酸脂酶產(chǎn)物)有響應。LNCaP clone FGC細胞并不形成一致的單層,而是形成集落,在傳代時可以反復吹吸分散。LNCaP clone FGC細胞僅僅輕輕地吸附在基底上,不形成匯合,很快使培養(yǎng)基變酸。LNCaP clone FGC細胞生長極其緩慢,傳代后48小時內(nèi)不應擾動。當培養(yǎng)瓶包裝運輸后,多數(shù)LNCaP clone FGC細胞從培養(yǎng)瓶底分離,懸浮在培養(yǎng)基中。
 

操 作 實 例
 

客戶提問:
LNCaP clone FGC細胞收到平衡一晚上,成團嚴重基本沒什么貼壁的怎么處理?

 


小尚解答:

細胞在運輸過程中因溫差,震蕩,碰撞等原因可能會出現(xiàn)漂浮成團的現(xiàn)象,不用著急,T25表面消毒放入培養(yǎng)箱中平衡2-4h后按以下步驟操作即可恢復貼壁。

① 收集所有培養(yǎng)基及漂浮細胞到無菌50ml離心管,1000rpm,5min離心收集細胞沉淀。

② 取培養(yǎng)基上清到4℃保存,用于培養(yǎng)細胞,以平穩(wěn)過度到客戶自己的培養(yǎng)基。在原50ml離心管中加入5mlPBS重懸細胞沉淀,盡量吹散后1000rpm,5min離心,棄上清。

③ 加入1ml胰酶輕輕震蕩混勻,勿直接吹打細胞,然后放入培養(yǎng)箱消化2-3min,消化完成后用移液器輕輕吹打幾下,吹散細胞后立刻加5ml完培終止消化。1000rpm,5min離心,棄上清。

④ 加入1ml完培重懸細胞接種到新培養(yǎng)瓶中。T25加10-12ml培養(yǎng)基培養(yǎng),通常2天左右換液一次,若培養(yǎng)基變黃及時換液,以維持一個相對穩(wěn)定的培養(yǎng)條件,有利于細胞活正常生長。
 

注意:

原T25剩余貼壁細胞密度大于70%,可以正常消化傳代;貼壁細胞較少可以加培養(yǎng)基正常培養(yǎng)至70%密度以上消化傳代;若幾乎沒有細胞則可以丟棄。

若出現(xiàn)傳代后次日貼壁較少的情況,可以收集培養(yǎng)基及漂浮細胞到離心管,離心收集未貼壁細胞,然后加新培養(yǎng)基盡量重懸吹散后接種回原培養(yǎng)瓶讓細胞繼續(xù)貼壁,注意小心操作,避免將已貼壁細胞吹下。

由于貼壁較弱細胞消化時間本身較短,必須控制消化時間和吹打力度,避免細胞消化或吹打死亡過多導致無法正常貼壁生長。
 

注 意 事 項
LNCaP clone FGC細胞培養(yǎng)難度相對較高,培養(yǎng)過程注意以下事項:

1.培養(yǎng)基營養(yǎng)不足以及pH值過低時會使細胞活力大幅度下降,建議加足量培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞,特別注意培養(yǎng)基變黃后要及時換液;

2.換液時注意不要直接沖擊到細胞表面以及過冷的試劑處理細胞,避免細胞回縮脫落;

3.細胞不要長時間高密度培養(yǎng),70-80%密度左右即可傳代,以維持細胞有較好的活性;

4.不要將細胞放置室溫過久或經(jīng)常挪動細胞,盡量讓細胞靜養(yǎng)。

5.細胞貼壁較弱,培養(yǎng)過程細胞通常呈聚集放射狀生長,可能會有部分細胞漂浮生長;

6.建議使用TC表面處理的高貼培養(yǎng)瓶或明膠、多聚賴氨酸等包被的培養(yǎng)瓶培養(yǎng)細胞,有利于細胞貼壁生長。


產(chǎn) /品

【SNL-356】LNCaP clone FGC(人前列腺癌細胞)

【SNLM-356】人前列腺癌細胞專用培養(yǎng)基


公 司 簡 介

www.sunncell.com.cn

武漢尚恩生物技術(shù)有限公司坐落于武漢東湖高新區(qū)光谷生物城,專注于細胞及系列產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和服務,公司建有標準化GMP實驗室、動物房,已整體通過ISO 9001:2015質(zhì)量管理體系認證,獲得高新技術(shù)企業(yè)、3551人才、瞪羚企業(yè)、科技小巨人等多項榮譽。  

公司主要研發(fā)生產(chǎn)細胞系、原代細胞、胎牛血清、基礎培養(yǎng)基、完全培養(yǎng)基、輔助試劑等系列產(chǎn)品,提供細胞及培養(yǎng)配套產(chǎn)品一站式采購;細胞庫凍存細胞系500余種,同時通過不間斷引種細胞擴大豐富細胞種類;公司還提供人源細胞系的STR鑒定、大小鼠的種屬鑒定服務等。  

公司細胞業(yè)務覆蓋國內(nèi)各大高校生物實驗室、生物研究機構(gòu)及一些生物科研、診斷、制藥公司,不斷為廣大科研工作者提供最優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和服務!尚恩生物—您專業(yè)的細胞供應商!

END
發(fā)布者:武漢尚恩生物技術(shù)有限公司
聯(lián)系電話:17764018385
E-mail:1242926414@qq.com

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