轉(zhuǎn)染 (Transfection): 是借助一定手段人工引入外源核酸 (DNA 或 RNA) 進(jìn)入細(xì)胞的過程。轉(zhuǎn)染目的: 是特異性增強(qiáng)或抑制轉(zhuǎn)染細(xì)胞中外源基因表達(dá)。

轉(zhuǎn)染的分類

轉(zhuǎn)染類型: 根據(jù)在宿主細(xì)胞表達(dá)時(shí)間長(zhǎng)短，分為瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染中，外源基因沒有整合到基因組上，僅存在于游離載體，短時(shí)間內(nèi)可獲得基因表達(dá)產(chǎn)物。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染中，外源基因整合到了基因組，可長(zhǎng)期穩(wěn)定地獲得目的蛋白。

圖 1. 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染^[1]

由于陽離子聚合物法操作簡(jiǎn)單，轉(zhuǎn)染效率高，一般是科研用戶的常客。所以小 M 給大家介紹細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程中，陽離子聚合物轉(zhuǎn)染的原理和操作步驟。

圖 2. 陽離子聚合物法轉(zhuǎn)染原理^[2]

轉(zhuǎn)染試劑與外源核酸形成陽離子聚合物，胞吞到細(xì)胞，最終導(dǎo)致基因產(chǎn)物“蛋白”的產(chǎn)生

優(yōu)點(diǎn): 與其他方法相比，對(duì)多種常用細(xì)胞具有高水平轉(zhuǎn)染效率；對(duì)原代細(xì)胞和難轉(zhuǎn)染細(xì)胞也具有較好的效果；高效低毒、操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性好。

操作步驟

1. 使用完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基將細(xì)胞按照一定細(xì)胞密度，鋪板于 96 孔細(xì)胞培養(yǎng)皿中，100 μL/well，于 37℃，5% CO₂ 細(xì)胞培養(yǎng)箱中，過夜貼壁生長(zhǎng)；

2. 當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到 70-90% 時(shí)，吸去原培養(yǎng)基，并加入無菌 PBS 緩沖液洗滌 2 次 (貼壁性較差的細(xì)胞，可省略此步驟)。加入無血清培養(yǎng)基 80 μL/well；

3. 96 孔板通常轉(zhuǎn)染 0.25 μg/20 μL/well DNA 進(jìn)行轉(zhuǎn)染。根據(jù) DNA (μg)：轉(zhuǎn)染試劑 (μL)= 1：3 比例制備轉(zhuǎn)染試劑/ DNA 無血清培養(yǎng)基復(fù)合物，輕輕混勻，室溫靜置 15 min。

具體每孔轉(zhuǎn)染試劑、DNA 及培養(yǎng)基用量如下表所示：

圖 2. 轉(zhuǎn)染步驟及轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)

Tips: 在熒光實(shí)驗(yàn)過程中，可以適當(dāng)加入抗熒光淬滅劑 (HY-K1042)，緩解各種熒光染料的熒光淬滅，輔助轉(zhuǎn)染效率的熒光檢測(cè)。

跟著小 M 已經(jīng)了解陽離子聚合物在細(xì)胞轉(zhuǎn)染中的應(yīng)用，您現(xiàn)在是否也想應(yīng)用在自己的實(shí)驗(yàn)中呢？下面就讓小 M 帶你瀏覽下 MCE 細(xì)胞轉(zhuǎn)染相關(guān)產(chǎn)品吧！

參考文獻(xiàn)

[1] Kim TK, Eberwine JH. Mammalian cell transfection: the present and the future[J].Anal Bioanal Chem. 2010 , 397(8):3173-8.

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