(1）固定;大鼠或小鼠灌注取腦,取腦后用多聚甲醛浸泡固定,即能達到沖洗的目的，又不損害組織。
(2）脫水;先后用15%、20%、30%的PB蔗糖溶液進行腦組織梯度脫水，腦組織沉下去就是脫水好了。(3）冰凍切片;推薦瑞沃德冷凍切片機。取出腦組織,用OCT膠包埋,一層層的包埋。
【注意事項】不能有氣泡,否則影響切片。不能留有空隙,否則會凍壞腦組織。冰凍切片的溫度一般再-18℃～-25℃之間，腦組織最好是-18°℃。